转染血管内皮细胞生长因子受体基因(Flt/Ig)对K562白血病细胞在体内生长影响的研究

中国病理生理杂志 2000年第10期第16卷 第七届肿瘤和第八届免疫专业委员会学术会议论文摘要

作者：赵钧铭　褚建新　王淑萍　徐世才

单位：中国医学科学院 血液学研究所 实验血液学国家重点实验室，天津 300020

　　目的：绝大多数肿瘤细胞均可产生血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)，它刺激间叶细胞形成新生血管，为肿瘤的生长提供营养。最近发现，白血病和骨髓瘤时骨髓血管密度也增加，缓解后仍高于正常。因此，通过阻断VEGF的作用来控制肿瘤生长，已成为肿瘤治疗的一个新的热点。已知VEGF主要是通过与间叶细胞膜上的VEGF受体结合发挥作用的。本研究用VEGV受体Flt的配体结合区D1-D3基因片段与人免疫球蛋白重链Fc段CH2-CH3区构建成Flt/Ig融合基因，并将其插入哺乳动物表达载体pcDNA3;将该融合基因转染K562白血病细胞系，然后接种于裸鼠体内，观察肿瘤生长情况，为肿瘤的基因治疗提供新的途径。方法：①用PCR方法从Flt cDNA文库中扩增配体结合区基因片断，并与免疫球蛋白重链的恒定区基因片断IgG1重组成Flt/Ig融合基因，插入到哺乳动物表达载体质粒pcDNA3,构建成pcDNA3/Flt/Ig；②采用电穿孔方法将pcDNA3/Flt/Ig转染K562白血病细胞，对照细胞转染pcDNA3/Ig，经过筛选，克隆，RT-PCR检测Flt/Ig mRNA的表达；③将表达Flt/Ig基因的细胞和转染pcDNA3/Ig的细胞分别给裸鼠移植，动态观察肿瘤的生长。结果：Flt/Ig融合基因转染K562白血病细胞后，经G418筛选获得4株Flt/Ig mRNA表达阳性的细胞株，取一株扩增后移植6只裸鼠，移植后第14、21和28 d实验组和对照组(括号内数值)的肿瘤体积(mm³)分别为756±349(1 446±661)，2 296±594(5 733±866),4 107±552(9 319±695)。实验组肿瘤的体积明显小于同期对照组，约为对照组的50%。结论：转染Flt/Ig融合基因的K562白血病细胞，在裸鼠体内肿瘤生长受到明显抑制，这可能与转染后的肿瘤细胞表达可溶性Flt/Ig蛋白，中和了肿瘤细胞分泌的VEGF，抑制肿瘤血管新生有关。

　　国家自然科学青年基金资助