逆转录病毒介导的反义C-MYC的抗小鼠L6565白血病作用

中国病理生理杂志 2000年第10期第16卷 第七届肿瘤和第八届免疫专业委员会学术会议论文摘要

作者：赵新永　殷莲华　孔宪寿

单位：上海医科大学病理生理学教研室，上海 200032

　　目的和方法：L6565白血病是我国特有的T-S-Z淋巴瘤/白血病系统中的实验系统的瘤株之一，经检测c-myc基因高表达。本文针对c-myc基因构建一个含有小鼠反义c-myc基因片段的逆转录表达载体pGAM，用磷酸钙沉淀法将pGAM导入表达包装细胞PA317，经筛选获得病毒效价5×10⁵ cfu/mL的病毒包装细胞，利用pGAM病毒成功的感染了L6565细胞，得到了G418抗性细胞L6565-as，经PCR分析病毒载体序列稳定地整合到PA317和L6565-as中，能够长期表达。结果：L6565-as和对照细胞光镜下形态均为圆形或椭圆形，细胞大小不一，但L6565as细胞核浆比例比对照细胞小。生长曲线和MTT法显示，L6565-as生长与对照细胞相比，生长明显受到抑制。流式细胞仪检测细胞周期：L6565as细胞G₀-G₁为45%，PGNsC对照和空白对照细胞分别为26%和29%。软琼脂克隆发现L6565as细胞形成克隆数量明显减少，为30个克隆/5000个细胞，空载病毒和空白对照分别为103和106个克隆/5000个细胞，二者有显著差异(P＜0.001)。免疫组化检测L6565as细胞c-myc蛋白表达为弱阳性(+)，而对照细胞为强阳性(+++)。Northern blot检测发现L6565as细胞c-myc mRNA表达比对照减少。结论：反义c-myc基因抑制了L6565白血病细胞的DNA合成，减缓了细胞的生长速度，并且使细胞恶性程度降低。本研究同时也是对我国T-S-Z系统白血病研究的一种深入。