介入化疗对鼻咽癌细胞凋亡和增殖的影响

临床耳鼻咽喉科杂志 2000年第8期第14卷 临床研究

作者：孟兆玮　何恩海　孟兆莲　吕世军　郭美红

单位：孟兆玮（潍坊医学院附属医院耳鼻咽喉科　山东潍坊，261031）；何恩海（潍坊医学院附属医院耳鼻咽喉科　山东潍坊，261031）；孟兆莲（潍坊市药检所）；吕世军（潍坊医学院病理教研室）；郭美红（潍坊医学院附属医院耳鼻咽喉科　山东潍坊，261031）

关键词：鼻咽癌；介入化疗；细胞凋亡

　　　摘要　目的：观察介入化疗对鼻咽癌细胞凋亡(APO)和细胞增殖的影响，并评价其疗效。方法：对10例鼻咽癌患者经颞浅动脉逆行颈外动脉插管，选择肿瘤供血血管灌注化疗药物5-氟脲嘧啶、顺铂、平阳霉素及烟酰胺。分别于化疗前、化疗后7 d取肿瘤组织，检测凋亡细胞和增殖细胞抗原（PCNA）。结果：介入化疗后临床缓解率为63%。化疗后7 d细胞凋亡指数（AI）1.24%，高于治疗前的0.52%。细胞增殖指数化疗前为42.4%，化疗后7 d为 51.2%。呈增高趋势。结论：鼻咽癌介入化疗可改善局部症状，这是通过诱导细胞凋亡而完成的。

Timing changes of apoptosis and proliferating cells nuclear antigen afterintra-arteiral infusion chemotherapy for nasopharyngeal carcinoma

MENG Zhao-wei　HE En-hai　MENG Zhao-lian　Lu Shi-jun　GUO Mei-hong

　　（The Affiliated Hospital of Weifang Medical College ，Weifang 261031）

　　（Institute of Pharmacon Test of Weifang）

　　（Department of Pathology,Weifang Medical College）

　　Abstract　Objective:To investigate the timing changes of apoptosis （APO） and PCNA after intra-arterial infusion chemotherapy for nasopharyngeal carcinoma.Method:Ten patients were subjected to percutaneous superficial temporal artery catheterization and infusion of anticancer drugs:5-Fu,DDp,BLM, nicotinamide.The biopsy of nasopharyngeal tumor tissues was performed before chemotherapy and 7 days after chemotherapy. Apoptotic cells were examined by TOT-mediated DUTP-fluorescein and labeling. The expression of proliferating cells nuclear antigen (PCNA) was detected with immunohistochemical staining.Result:AI of nasopharyngeal cancer cells before chemotherapy and 7 days after chemotherapy was 0.52% and 1.42%,PI was 42.4% and 51.2%.Conclusion:Intra-arterial infusion chemotherapy not only induced apoptosis effectively, but also inhibited temporarily tumor cells proliferation in patients. The curative surgical treatment should be performed as soon as possible after chemotherapy.

　　Key words　Nasopharyngeal carcinoma　Infusion chemotherapy　Apoptosis

　　介入化疗已逐渐在临床开展。但化疗对肿瘤细胞的作用尚需作进一步探讨。新近，我们对10例Ⅲ、Ⅳ期鼻咽癌患者经双侧颞浅动脉逆行插管化疗，分别检测化疗前、后鼻咽癌细胞凋亡指数(AI)和增殖细胞指数(PI)，并进行对比，借以观察介入化疗对鼻咽癌细胞凋亡的作用和影响。

　　1　资料与方法

　　1.1　临床资料

　　择经病理证实的Ⅲ、Ⅳ期鼻咽癌10例，男7例，女3例；平均年龄56岁。原发癌及颈部转移灶均限于颈外动脉支配区,身体状况尚好。均经介入治疗后常规放射治疗。

　　1.2　研究方法

　　1.2.1　治疗：经颞浅动脉逆行插管, 根据肿瘤所在位置,进入颈外动脉,一般置管约6～8 cm(不能进入颈总动脉) 。然后应用灌注泵灌注化疗药物5-氟脲嘧啶(600 mg/m²)、顺铂(20 mg/m²)，平阳霉素(7 mg/m²)和烟酰胺(300 mg/m²)。观察化疗后的临床症状及化疗反应。常规进行肝肾功能、血常规、免疫状况检查，于7 d后再进行病理检查。

　　1.2.2　检测方法：于化疗前及化疗后7 d，取肿瘤组织，同时取鼻咽部远离肿瘤的正常粘膜，作对照。

　　细胞凋亡的检测：取病理组织切片，固定包埋，HE染色，采用末端脱氧核苷酸转移酶（TDT）介导的脱氧核苷酸原位末端标记法^〔1〕检测凋亡细胞(细胞凋亡检测试剂购自北京医科大学分子病理系，为美国Promega公司产品。细胞核染色黄色为阳性细胞)。40倍高倍镜下，计数1 000个细胞中阳性细胞，以百分数表示，计数结果作为凋亡指数（AI）。

　　细胞增殖核抗原（PCNA）的检测：采用免疫组化的方法，PCNA的染色结果的计数方法同上，增殖细胞指数（PI）即（PCNA 阳性细胞数/癌细胞数）×100%。多组资料在方差分析的基础上作两两比较，进行q检验。

　　2　结果

　　介入化疗后，10例鼻咽癌患者中5例症状好转，但均有不同程度的食欲降低、乏力。肝肾功能正常，白细胞有轻度下降，与化疗前相比无显著性差异（P＞0.05)。

　　介入化疗后，肿瘤凋亡细胞的主要形态改变为细胞皱缩，胞浆浓集，核固缩，胞膜突起或缢断，形成凋亡小体。治疗前鼻咽癌AI为（0.52±0.13)%，明显低于正常组织的（2.13±0.28)%(P＜0.01)。化疗7 d，AI为（1.24±0.18)%，高于治疗前。

　　化疗前PI为（42.41±11.22)%，化疗后为（51.28±10.77)%,化疗后明显高于化疗前,差异有显著性意义（P＜0.01)。

　　3　讨论

　　介入化疗是通过肿瘤的主要供血血管一次性或多次性给予较高浓度的化疗药物，更好抑制或杀伤细胞^〔2〕。同时药物可通过血流循环至全身血液或组织起到作用。体外实验证明，化疗药物是通过诱导细胞凋亡来消灭肿瘤细胞的^〔3〕。我们采用末端转移酶（TDT）介导脱氧核苷酸末端标记法，检测介入化疗前后癌组织中凋亡细胞的变化，了解介入治疗在人体内对细胞凋亡的影响。该方法具有以下优点：①原位检测可了解到凋亡细胞的分布特点；②标本经甲醛固定后石蜡包埋，细胞组织结构稳定；③可标记出凋亡细胞；④HE染色可除外坏死细胞，有较高的特异性^〔1〕。

　　细胞凋亡是机体主动清除多余细胞的正常生理现象，凋亡细胞表现为细胞核皱缩，失去细胞间的连接，细胞浆浓集，胞核固缩，胞膜突起缢断形成凋亡小体，并迅速被周围的上皮细胞、巨噬细胞所吞噬。细胞突变形成肿瘤后，细胞凋亡率明显降低。本文资料表明，癌组织细胞凋亡率低于正常组织，癌组织细胞凋亡数量减少是癌肿不断增大的主要原因。我们通过介入化疗使癌组织中细胞凋亡数量增加，就会有效地控制癌症的发展。目前研究证明，5-氟脲嘧啶、顺铂、平阳霉素能使转移灶退变，是通过细胞凋亡来实现的。它们也是通过诱导癌细胞凋亡来治疗癌肿的，是治疗鼻咽癌的首选药物。在鼻咽癌放疗前应用这三种药物，观察对APO的影响，主要是通过诱导细胞凋亡使肿瘤缩小或退变。

　　肿瘤的生长除与肿瘤细胞的凋亡有关外，与肿瘤细胞增殖率也有重要关系。我们通过免疫组化方法检测增殖细胞核抗原，发现肿瘤细胞核抗原明显高于正常组织。介入治疗后，增殖细胞核抗原高于化疗前。表明介入化疗可使肿瘤组织增殖性受到抑制。通过以上机制介入化疗可达到治疗肿瘤的目的。

　　参考文献

　　1，Wijsmal J H，Jonker R R，Kejzer R，et al. A new method to detect apoptosis in paraffin section in situ end-labeling of fragmented DNA.J Histochem Gytochem,1993,4011:7～12

　　2，江刚，闵华庆，张锦民.动脉灌注化疗在晚期鼻咽癌综合治疗中作为诱导化疗的价值.临床耳鼻咽喉科杂志，1995，9：329～330

　　3，Thompson C B.Apoptosis in the pathogenesis and treatment of diseases. Science,1995,267:1456～1462

(收稿 1999-12-10　修回 2000-02-21)