115例肺癌及肺转移癌99mTc－甲氧基乙丁基异睛功能检测MDR1P－gp的临床分析
中国肿瘤临床1999年第26卷第10期
刘叙仪 方健 吴梅娜 詹茂程 王洁
摘 要 目的：研究99mTc－sestamibi(甲氧基乙丁基异睛）MDR1P－gp的检出率与疗效、预后的关系，及与免疫组化结果的相关性。方法：疗前、疗后检测99mTc－sestamibi的滞留值判断肿瘤细胞P－gp泵出功能。结果：全组检出率50％(57/115)，肺癌51％(55/108)，肺转移癌29％(2/7)。NSCLC与SCLC检出率无差别，但在99mTc－sestamibi检出P－gp(＋)中NSCLC78％(43/55)，明显高于SCLC22％(12/55)。59例疗前，疗后总符合率90％(53/59)：阳性符合率46％；阴性符合率44％。疗前P－gp(－)、疗后P－gp(＋)10％。P－gp特异性单抗C219免疫组化检测25例肺癌标本，与99mTc－MiBi总符合率72％(18/25)，互补28％(7/25)。99mTc－MiBi示P－gp(－)者CR＋PR均明显优于P－gp(＋)者(P＜0.01).41/57例P-gp(+)者化疗期并用耐药调变剂,RR24%.肺癌28%(1+10/39):NSCLC21%(0+6/29);SCLC 50%(1+4/10).中位生存期:P-gp(-)11个月,(+)5个月(P=0.002).Kaplan-Meier'S生丰期曲线及Log-Rank test(P＜0.01,x2=10.3729)均示P-gp(-)者.结论:99mTc-MiBi断层显像技术可作为肺癌临床功能性检测P-gp方法,有预后意义,并与免疫组化检测法有互补性
关键词：肺癌 多药耐药 P－gp 99mTc－MiBi 预后
原发性晚期肺癌（Ⅲb Ⅳ）及转移性肺癌预后差，尽管其中不乏对化疗敏感的肿瘤，但耐药仍为最终失败的原因之一。其中MDR1P－gp介导的MDR仍为主要耐药表型之一[1,2]。临床多沿用肿瘤标本经免疫组化技术检测P－gp表达，或较敏感的RT－PCR检测MDR1 mRNA水平表达，及其它分子技术，但都需要肿瘤标本[3,4]，对同一患者，临床难获治疗前、后标本以观察耐药性改变。1993年Piwnica－Worms等[5]经体内、外研究证实99mTc－sestamibi(99mTc－MiBi/甲氧基乙丁基异睛）为MDR1P－gp底物，可被P－gp识别、排出，并经其它体外研究证实[6,7]。Rao等采用转基因技术在细胞水平证实了上述发现。从而开创了99mTc－MiBi功能性检测MDR1P－gp表达的方法，但临床有关报道则相应少见[9,10]。
1 材料与方法
1.1 材料
115例经组织学及全面分期检查确诊的Ⅲb及Ⅳ期肺癌（108例），肺转移癌(7例）。
1.2 检测方法
疗前均采用99mTc－MiBi断层显像技术，对肺内病灶及局部淋巴引流区行MDR1P－gp功能性检测。患者静注99mTc－MiBi1.11GB9，分别于30及120分钟行颈－胸部断层采集，然后采用滤波反投影法行图像重建。参照胸CT片提示的病灶位置选取0分钟和120分钟两套99mTc－MiBi断层像中相应横断面，行断层面叠加，获两幅包含整个病灶的横断面。根据病灶部位放射性随时间的增减变化间接推测P－gp表达情况，即计算120分钟病灶99mTc－MiBi潴留值，凡99mTc－MiBi阴性者P－gp(＋)，反之为(－)[11]。其中25例胸外转移灶，采用P－gp特异单抗之一C219，经免疫组化技术（IHC)[12]检测P－gp表达，并与99mTc－MiBi检出率进行比较。其中59例化疗3周后复查了99mTc－MiBi。
1.3 治疗方法
NSCLC以CDDP(90～100mg/m2)为主，联合MMC，NVB或5－FU＋醛叶酸等。SCLC则以CTX(1000mg/m2)ADM(40～50mg/m2)为主，或以CDDP为主联合VCR、VDS或VP－16等，均3～4周重复。3次化疗后再分期检查包括99mTc－MiBi检测。疗前99mTc－MiBi示P－gp(＋)者，化疗期并用耐药调变剂，用法见文献[13]。
1.4 疗效评定
Zubrod－WHO－ECOG记分标准判断全身机能状况。疗效（CR或PR）沿用国际标准。生存期自治疗首日至死亡或失访日止，截止于1997年12月31日。Kaplan－Meier法计算生存期曲线，Log－Ranktest比较生存期优势，修正卡方及孙氏快速机率法比较显著性。
2 结果
2.1 115例临床情况（表1）
SCLC中腺癌为主(P＜0.01),鳞癌及腺癌中低分化型占51%(38/74).本组Ⅳ期为主占63%,其中NSCLC明显多于SCLC(P＜0.01)
表1 115例疗前临床特点
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|
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例(％) |
χ2 |
P值 |
|
性别（例） |
男65;女50 |
— |
— |
— |
|
中位年龄（岁） |
60(17～75) |
— |
— |
— |
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组织类型 |
肺癌 |
108— |
— |
— |
|
NSCLC |
78(72) |
— |
— |
|
腺癌 |
56(72) |
27.9230 |
＜0.001 |
|
鳞癌 |
28(23) |
— |
— |
|
其它 |
4(5) |
— |
— |
|
SCLC |
30(28) |
— |
— |
|
肺转移癌 |
7*— |
— |
— |
|
TNM病期 |
Ⅳ期 |
75(65) |
— |
— |
|
肺癌 |
68(63) |
— |
— |
|
NSCLC |
49(72) |
24.7352 |
＜0.001 |
|
SCLC |
14(24) |
— |
— |
|
其它肿瘤 |
7(100) |
— |
— |
*乳腺癌(3)、会厌低分化鳞癌(1)、膀胱移形细胞癌(1)、软组织黑色素瘤(1)、原发不明低分化腺癌(1)
2.2 99mTc－MiBi检测MDR1P－gp表达
疗前全组检出率50％(57/115)，肺癌51％，NSCLC与SCLC无差别。但P－gp(＋)肺癌中NSCLC明显高于SCLC(P＜0.01),肺转移癌P-gp(+)29%(2/7)(表2).59例疗前及3周期化疗后检测99mTc-MiBi结果(表3).疗前、疗后总符合率90%:P-gp均(+)为46%;均(-)为44%;疗前P-gp(-)/疗后P-gp(+)10%.
表2 99mTc－MiBiP－gp检出率
|
组别 |
例 |
例(检出％) |
χ2 |
P值 |
|
全组 |
115 |
57(50) |
— |
— |
|
肺癌 |
108 |
55(51) |
— |
— |
|
肺转移癌 |
7 |
2(29) |
— |
— |
|
肺癌P－gp(＋) |
55 |
|
|
|
|
NSCLC |
|
43(78) |
32.7272 |
＜0.001 |
|
SCLC |
|
12(22) |
表3 59例肺癌化疗前、后99mTc－MiBiP－gp检出率例(％)
|
|
例 |
均(－) |
均(＋) |
前(－)/后(＋) |
|
SCLC |
15 |
5(33) |
8(53) |
2(13) |
|
NSCLC |
44 |
22(50) |
18(41) |
4(16) |
|
计 |
59 |
27(46) |
26(44) |
6(10) |
2.3 99mTc－MiBi与免疫组化检测符合率
25例肺癌胸外转移灶免疫组化P－gp（表4）：与99mTc－MiBi总符合率72％(18/25)。P－gp(＋)及(－)符合率均为36％(9/25)，两者互补28％(7/25)：IHC(＋)/99mTc－MiBi(－)3例，IHC(－)/99mTc－MiBi(＋)4例。
表4 25例肺癌99mTc－MiBi及IHC同时检测P－gp的相关性及与疗效关系
|
99mTc－MiBi/IHC |
P－gp检出率 n(％) |
CR＋PR n(％) |
|
(－)/(－) |
9(36)* |
1＋3(44) |
|
(＋)/(＋) |
9(36)* |
0＋2(22) |
|
(－)/(＋) |
3(12)△ |
0＋1(33) |
|
(＋)/(－) |
4(16)△ |
0 |
*总符合率18/25(72％)△互补率7/25(28％)
2.4 疗前99mTc－MiBi检测P－gp与疗效(RR)及生存期关系
疗前99mTc－MiBi检测P－gp与疗效(RR)及生存期关系（表5）：全组，特别是NSCLC，P－gp(－)与RR符合率明显高于P－gp(＋)与RR的符合率。全组41/57例疗前99mTc－MiBi示P－gp(＋)者，化疗期并用耐药调变剂后RR24％(1＋10/41)。肺癌28％(1＋10/39):NSCLC21％(0＋6/29);SCLC50％(1＋4/10)，其中CR1例术后病理亦CR。2例肺转移癌无效。
表5 99mTc－MiBi检出P－gp与RR(CR＋PR)关系
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级别 |
例数 |
例(RR％) |
X2 |
P值 |
|
P－gp(－) |
P－gp(＋) |
|
全组 |
115 |
30/58(52) |
12/57(21) |
10.3398 |
＜0.01 |
|
肺癌 |
108 |
27/53(51) |
12/55(22) |
8.7017 |
＜0.01 |
|
NSCLC |
78 |
16/35(46) |
7/43(16) |
6.6869 |
＜0.01 |
|
SCLC |
30 |
11/18(61) |
5/12(42) |
— |
— |
|
肺转移癌 |
7 |
3/5(60) |
0/2(0) |
— |
— |
110例可计生存期：P－gp(－)56例，(＋)54例。中位生存期（median survical duration,MSD):P－gp(－)11个月，(＋)5个月(P=0.0002)。Kaplan－Meier′s生存期曲线（附图）及log－ranktest(P0.01,x2=10.3729)均示P-gp(-)者生存期明显优于P-gp(+)12例(8+～48个月+).P-gp(+)5例8+～48个月+).
附图110例肺癌生存曲线(Kaplan－Meiers法)
3 讨论
肺癌耐药机理复杂，无论原发或获得性耐药，MDR1P－gp介导的MDR表型仍为最主要的耐药机理之一[2]。临床采用肿瘤标本，用不同的方法如特异性较强的免疫组化技术或敏感的RT－PCR从蛋白或mRNA水平检测MDR1表达。由于肿瘤内耐药细胞存在异质性，及同一患者难获耐药后标本，从而影响了耐药检测的精确性及临床难以进行耐药的动态观察。自1993年Piwnica－Worms等研究证实99mTc－sestamibi(99mTc－MiBi甲氧基乙丁基异睛）为MDR1P－gp底物[5]，如同蒽环类、长春花碱类、鬼臼碱毒素类或紫杉醇类等抗癌药同样为P－gp识别、泵出，从而开创了99mTc－MiBi断层显像功能性检测P－gp的新纪元。
本组99mTc－MiBiP－gp检出率50％(57/115)，肺癌51％(55/108)，与某些用免疫组化的检出率相似[2,12]，却高于我组用特异性单抗C219的检出率[12]。P－gp在细胞膜内、外均存在多个结合位点，99mTc－MiBi检出P－gp表达较高，是否存在99mTc－MiBi与P－gp多位点结合有关？或存在其他因素，有待进一步研究。NSCLC与SCLCP－gp表达无差异，与文献中免疫组化结果类同[10,13,14]。本组25例两种方法总符合率72％，互补率28％，提示疗前99mTc－MiBi断层显像检测MDR1P－gp表达的可行性。
与多数报道的免疫组化检出的P－gp同样[15]，99mTc－MiBi检测P－gp(－)者，其RR、MSD及生存期均明显优于P－gp(＋)者。从而说明了疗前99mTc－MiBi功能性检测P－gp与免疫组化法相似有预测预后作用。
59例治疗前后观察99mTc－MiBi检测P－gp者：10％P－gp由(－)转(＋)；90％与疗前相同，其中包括41例疗前P－gp(＋)，化疗期并用耐药调变剂（resistance modifers,RMs）者，3周期化疗后RR24％(1＋10/41)，而99mTc－MiBi示P－gp仍(＋)。原因可能为RMs主要作用机理是与细胞膜内外的P－gp竞争与药物的结合位点，而使P－gp丧失泵出功能，一旦撤除RMs或降低其调控浓度，P－gp运转功能失常有关。99mTc－MiBi可检出P－gp表达，而本组复查P－gp功能是在停用RMs3周后，故未达动态观察及检测RMs疗效的目的，而化疗期连续检测99mTc－MiBi确有一定难度，有待进一步探索。
本研究结果示疗前99mTc－MiBi断层显像检测P－gp功能是可行的，且与IHC有互补性，有一定预后意义。但这仅是初步结果，也存在一些待解决的问题。临床亦需要探索其他动态检测MDR的指标，以监测MDR及指导化疗。
*本文课题受国家“九五”攻关项目基金资助(96－906－01－23)
作者单位：北京医科大学临床肿瘤学院北京市肿瘤防治研究所（北京市100036）
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