线粒体肌酸激酶在肺癌组织中的表达
中国肿瘤临床 2000年第1期第27卷 论著
作者：成继民 陈兴 张哲 贺占国 王更银 郭宏
单位：成继民（白求恩国际和平医院 石家庄市050082）；陈兴（白求恩国际和平医院 石家庄市050082）；贺占国（白求恩国际和平医院 石家庄市050082）；王更银（白求恩国际和平医院 石家庄市050082）；郭宏（白求恩国际和平医院 石家庄市050082）；张哲（河北省医学科学院）
关键词：线粒体肌酸激酶肺癌免疫组化
摘要目的：研究线粒体肌酸激酶(CK－mit)在肺癌中的表达及意义。方法：应用抗人心肌 线粒体肌酸激酶单克隆抗体和免疫组化LSAB法对50例肺癌组织进行CK－mit检测。结果：肺 癌阳性率为58％，阳性与阴性表达相差显著(P＜0.05)。其中肺腺癌阳性率87.5％(14/16)， 鳞癌47.6％(10/21)，未分化癌30％(3/10)，腺鳞癌100％(2/2)，透明细胞癌0％(0/1)。腺 癌较鳞癌和未分化癌对线粒体肌酸激酶表达阳性率高(P＜0.05)。结论：线粒体肌酸激酶有助 于肺癌的诊断。
Expression of Mitochondrial Creatine Kinase in Lung Cancers
Cheng Jimin Chen Xing Zhang Naizhe et al
（Bethune International Peace Hospital, Shijiazhuang）
Abstract Objective: To study the expression of mitochondrial creatine kinase (CK－ mit) in lung cancers. Methods: Immunohistochemical staining was used to determine the expression of CK－ mit in 50 lung cancers. Results: The positive rates were 87.5％ (14/16) for adenocarcinoma, 47.6％ (10/21) for squamous cell carcinoma and 30％ (3/10) for undifferentiated carcinoma. Conclusion:Immunohistochemistry of CK－ mit may be helpful in early diagnosis of lung cancer.
Key Words Mitochondrial creatine kinase Lung cancer Immunohistochemistry
线粒体肌酸激酶(CK－mit)存在于线粒体内膜外表面，在磷酸肌酸穿梭机制中起重要作用 。目前尚未见以免疫组化方法研究CK－mit在肺癌组织中表达的报道。我们应用自行制备的 鼠抗人CK－mit单克隆抗体，以免疫组化LSAB法进行了肺癌组织的免疫组化观察，以期了解C K－mit在肺癌组织中的表达及意义。
1 材料与方法
1.1观察材料
选择我院1997年50例肺癌手术和内窥镜标本蜡块，其中23例带正常粘膜上皮或腺体。50 例肺癌中腺癌16例，鳞癌21例，未分化癌10例，腺鳞癌2例，透明细胞癌1例。
1.2免疫试剂
第一抗体为鼠抗人CK－mit单克隆抗体(免疫斑点法效价为1:10，本院检验科制备)。LSAB 试剂盒购自武汉博士德生物公司。
1.3染色方法
5μm石蜡切片脱蜡入水；0.3％H2O2甲醛溶液20分钟；0.01mol/L、pH7.6、PBS洗3×5分 钟；1％BSA封闭，微波炉5档5分钟；一抗1:50稀释，5档10分钟；PBS洗3×5分钟；二抗1:10 0稀释，5档15分钟；PBS洗3×5分钟；LSAB复合物1:100稀释，5档10分钟；PBS洗3×5分钟； DAB、H2O2显色10分钟；苏木精复染脱水，透明，封片。
2 结果
肺癌对CK－mit表达阳性率为58％，正常粘膜上皮和腺体表达阴性，少数粘膜上皮和腺体 腔缘呈假阳性。阴性对照不着色。各类型肺癌表达分别为腺癌87.5％(14/16)(图1)，鳞癌47.6 ％(10/21)(图2)，未分化癌30％(3/11)，腺鳞癌100％(2/2)，透明细胞癌0％(0/1)。癌组织 分化程度越高，阳性表达越强，分化低则表达弱或不表达。如低分化鳞癌阳性很低，未分化 癌多数不表达(附表)。
图1肺腺癌CK－mit表达阳性，癌细胞浆呈棕黄色LSAB法×400
图2肺鳞状细胞癌CK－mit表达阳性，癌巢呈棕黄色，癌角化细胞尤甚LSAB法×400
附表 CK－mit在肺癌中的表达
| 分类 |
例数 |
阳性表达例(％) |
| 高分化 |
低分化 |
未分化 |
| 腺癌 |
16 |
10/10(100) |
4/6(66.7) |
|
| 鳞癌 |
21 |
6/7(85.7) |
4/14(28.6) |
|
| 腺鳞癌 |
2 |
1/1(100) |
1/1(100)? |
|
| 未分化癌 |
10 |
|
|
3/10(30) |
| 透明细胞癌 |
1 |
|
|
0/1(0) |
经χ2检验，腺癌与鳞癌和未分化癌阳性表达相差显著(P＜0.05)3 讨论
CK－mit是肌酸激酶的一种同工酶，存在于线粒体内膜，在线粒体呼吸控制中起重要作用 。在有氧情况下，通过磷酸穿梭机制提供肌肉收缩的能量［1］。近年来，国外研究发现肺 癌及某些消化道癌症患者血清中CK－mit活性明显增高，而血清CK总量测定却在正常范围，提出其可做为肿瘤标志酶［3,4］，正常人血清无CK－mit，如在血清中出现，可能是肿瘤组织漏出所致，应高度怀疑患有恶性肿瘤［5,6］。
在国内尚未见有CK－mit与恶性肿瘤间关系的研究。我们的研究结果显示CK－mit在肺癌 表达较强为58％。其中腺癌、鳞癌、未分化癌、腺鳞癌、透明细胞癌表达分别为87.5％、47 .6％、30％、100％、0％。除腺鳞癌和透明细胞癌例数太少，还有待进一步观察外，其前三 者中，腺癌最强，与后两者差异显著。从以上结果看，癌分化程度越低，表达越低，正常粘 膜上皮不表达。从酶的功能上看，CK－mit是线粒体负责能量代谢的酶。恶性肿瘤生长旺盛 ，需大量能量供应其无限制生长，所以肺癌组织中CK－mit含量高。我们的实验结果证实了 这点。故CK－mit可用来检测肺癌，有助于肺癌的早期诊断。
本文课题受国家自然科学基金资助
参考文献
1，Nicolay K,Rojo M,Wallimann T,et al. The role of contact sites between inner and outer mitochondrial membrane in energy transfer. Biochem Biophys Acta,1990; 1018:229
2，Stein W,Bohner J,Renn W. Creatine kinase type 2:results of a prospective study in hospitalized patients.Clin Chem,1985; 31:1959
3，Usui A,Fujita K,Imaizumi M,et al. Diagnostic application of mitochondrial enzymes and isoenzymes. Clin Chem Acta,1989; 185:253
4，陈兴,张哲,郑锡铭,等.人心肌线粒体肌酸激酶抗血清的制备.中国学术期刊文摘,1996;2(2):119
5，Okano K,Yamamoto K,Ohba Y,et al. Determination of creatine kinase isozyme in sera and tissues of patients with various lung carcinomas. Clin Chem Acta,1987; 164:47
6，Stein W,Bohner J,Renn W,et al. Source of elevated serum mitochondrial creatine kinase activity in patients with malignancy. Clin Chem Acta,1987; 169:159
收稿1999－03－22
修回1999－05－10
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