p53蛋白、雌激素受体、孕激素受体在非小细胞肺癌中的表达及临床意义
中国肺癌杂志 2000年第4期第3卷 论著
作者：张海青 吕福东 邓立宏 王术增 严红
单位：张海青 吕福东 邓立宏 王术增 严红（101149 北京市胸部肿瘤结核病医院病理科）
关键词：肺肿瘤；p53蛋白质；雌激素；孕激素；受体
【摘要】 目的 检测非小细胞肺癌(NSCLC)中p53蛋白、雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)表达与临床病理和预后的相关性。方法 应用免疫组织化学SP法检测147例NSCLC癌组织标本中p53、ER、PR的表达。结果 p53蛋白总阳性率为61.2％(90／147)，鳞癌、腺癌、鳞腺癌、大细胞癌阳性率分别为63.5％(40／63)、57.6％(33／66)、66.7％(10／14)、50％(2／4)。腺癌p53蛋白阳性表达与其预后有密切关系，生存期低于3年组和高于3年组的p53蛋白阳性率分别为75％(21／28)和44.7％(17／38)，差异有显著性(P＜0.025)。ER和PR总阳性率分别为49.7％(73／147)和76.9％(113／147)，鳞癌与腺癌的ER阳性率分别为38.1％(24／63)和66.7％(44／66)，PR阳性率分别为66.7％(42／63)和90.9％(60／66)。ER和PR的阳性表达与肺癌组织分型相关，腺癌的阳性率明显高于鳞癌(P＜0.005)；ER和PR表达的部位在鳞癌和腺癌中亦有不同，鳞癌以核阳性居多，腺癌则以浆阳性为多。在PR阳性组中，细胞核阳性者的3年生存率低，而细胞浆阳性者生存率高，差异有显著性(P＜0.025)。结论 检测肺腺癌p53蛋白表达可作为判断其预后的指标；检测ER和PR表达在鉴别肺鳞癌和肺腺癌中具有一定的参考价值；PR阳性表达在细胞核者的预后差。
【中图分类号】 R734.202
Expression and clinical significance of p53 protein, estrogen and progesterone receptors in non-small cell lung cancer
ZHANG Haiqing LU Fudong DENG Lihong WANG Shuzheng YAN Hong
（Department of Pathology, Beijing Thorax Tumor and Tuberculosis Hospital (Institute), Beijing 101149, P.R.China）
【Abstract】 Objective To investigate the relationships between expression of tumor suppressor gene p53 protein, estrogen receptor (ER), progesterone receptor (PR) and clinicopathology and prognosis in human non-small cell lung cancer (NSCLC). Methods Expression of p53 protein, ER and PR in 147 NSCLC specimen was detected by SP immunohistochemistry method. Results Overall, 61.2％(90／147) tumor tissues had positive p53 staining. The positive rate of p53 expression in squamous cell carcinoma, adenocarcinoma, adenosquamous carcinoma and large cell carcinoma was 63.5％(40／63), 57.6％(38／66), 66.7％(10／14), and 50％(2／4) respectively. The overexpression of p53 protein was associated with the prognosis of patients with adenocarcinoma, the positive rate of p53 expression of patients who survived for less than 3 years was 75％, which was significantly higher than 44.7％ of patients who survived for more than 3 years(P＜0.025). For ER and PR, the overall positive rate was 49.7％(73／147) and 76.9％(113／147) respectively. The positive rate of squamous cell carcinoma and adenocarcinoma was significantly higher than that of squamous cell carcinoma (P＜0.005). Besides, expression area of ER and PR was often in the nucleus for squamous cell carcinoma and in the cytoplasma for adenocarcinoma (P＜0.005). The 3-year survival rate in patients with cytoplasma-staining for PR was significantly higher than that with nucleus-staining (P＜0.025). Conclusion The results suggest that overexpression of p53 in adenocarcinoma could be used as a prognostic factor for the patients. Detection of ER and PR may have a definite value in differentiating squamous cell carcinoma from adenocarcinoma. The prognosis is poor for PCR-positive patients with nucleus-staining.
【Key words】 Lung neoplasms p53 protein Estrogen Progesterone Receptor
p53基因是人类肿瘤中突变率最高的抑癌基因，其在肺癌中的突变率超过了50％［1］，可达100％［2］。人们对雌激素受体(estrogen receptor, ER)和孕激素受体(progesterone receptor, PR)在肺癌中的表达及其临床价值尚有不同见解。我们用免疫组织化学方法检测了147例非小细胞肺癌石蜡包埋组织，并结合临床病理资料，进一步探讨了p53蛋白、ER、PR阳性表达与非小细胞肺癌临床病理和预后的关系。
1 材料和方法
1.1 标本及临床病理资料 本研究所用资料均系北京胸部肿瘤结核病医院1993年1月至1994年12月间手术切除的原发性非小细胞肺癌标本，共计147例。男性103例，女性44例。年龄32～75岁，平均56.2岁。所有病例均按世界卫生组织1981年肺癌分型标准分类，鳞癌63例，腺癌66例，鳞腺癌14例，大细胞癌4例。按1997年国际肺癌分期标准，Ⅰ期肺癌75例，Ⅱ期肺癌20例，Ⅲ期肺癌49例，Ⅳ期肺癌3例。高分化癌9例，中分化癌112例，低分化癌26例。淋巴结转移61例，无淋巴结转移86例。以上病例均有详细的随访结果，随访时间为3～5年。
1.2 免疫组织化学法 将10％福尔马林固定、石蜡包埋的癌组织制成4～5μm切片，常规脱蜡，浸入0.01mol／L、pH为6.0的枸橼酸盐缓冲液内，微波炉抗原修复15分钟，温度为92～98℃。用SP法进行免疫组织化学染色。p53(DO-1)单克隆抗体为美国Santa Cruz公司产品，ER、PR及SP试剂盒系北京中山生物试剂公司提供的Zymed公司产品。p53单克隆抗体以肿瘤细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性细胞，ER、PR以肿瘤细胞核或浆出现典型棕黄色颗粒为阳性，阳性细胞数目在10％～25％为(＋)，25％～50％为()，超过50％为()。每次实验均设阳性和阴性对照。p53蛋白用已知肺癌阳性切片作对照，用正常肺组织作阴性对照。ER、PR用已知乳腺癌阳性切片作阳性对照，阴性对照用PBS代替一抗。
1.3 数据处理 行χ2检验，P＜0.05为有显著性差异。
2 结果
2.1 p53免疫组化结果及其与临床病理、预后的相关性 p53蛋白定位于肿瘤细胞核内(图1、2)，肺组织和非肿瘤组织均为阴性。本组p53蛋白总阳性率为61.2％(90／147)，其中鳞癌阳性率为63.5％(40／63)，腺癌阳性率为57.6％(38／66)，鳞腺癌为66.7％(10／14)，大细胞癌为50％(2／4)。p53蛋白阳性表达与肺腺癌的预后有明显相关性，即p53蛋白阳性表达的肺腺癌3年生存率低，为51.5％(17／38)，而阴性表达者3年生存率高，为75％(21／28)，两者差异有显著性(P＜0.025)。p53蛋白阳性表达与肺癌组织学类型、肿瘤分化程度、肺癌分期、有无淋巴结转移等无关。
图1 鳞癌p53蛋白阳性 ×200
细胞核呈棕黄色
Fig 1 p53-positive squamous cell carcinoma by SP immunohistochemical method ×200
The nuclei of cancer cells were in brown-yellow.
图2 腺癌p53蛋白阳性 ×400
细胞核呈棕黄色
Fig 2 p53-positive adenocarcinoma by SP immunohistochemical method ×400
The nuclei of cancer cells were in brown-yellow.
2.2 ER、PR免疫组化结果及其与临床病理、预后的相关性
2.2.1 免疫组化结果 ER、PR阳性部位定位于肿瘤细胞核或胞浆(图3～5)。ER和PR总阳性率分别为49.7％(73／147)和76.9％(113／147)，鳞癌和腺癌的ER阳性率分别为38.1％(24／63)和66.7％(44／66)，PR阳性率分别为66.7％(42／63)和90.9％(60／66)。总体观察，ER阳性反应较弱，多为(＋)，而PR反应较强，大部分为(+++)。
图3 腺癌ER阳性 ×400
肿瘤细胞浆内见大量棕黄色颗粒
Fig 3 ER-positive adenocarcinoma by SP immunohistochemical method ×400
There were a lot of brown-yellow granules in the cytoplasma of cancer cell.
图4 鳞癌PR阳性 ×200
肿瘤细胞核呈棕黄色
Fig 4 PR-positive squamous cell carcinoma by SP immunohistochemical method ×200
The nuclei of cancer cells were in brown-yellow.
图5 腺癌PR阳性 ×400
肿瘤细胞浆内见大量棕黄色颗粒
Fig 5 PR-positive adenocarcinoma by SP immunohistochemical method ×400
There were a lot of brown-yellow granules in the cytoplasma of cancer cell.
2.2.2 ER、PR阳性表达与肺癌组织学分型的关系 表1显示腺癌患者的ER和PR的阳性率均明显高于鳞癌患者(P＜0.005)。
表1 ER、PR阳性表达与肺癌组织学类型的关系
Tab 1 The relation between ER and PR positive
expression and histological types of lung cancer
| Histology |
ER |
PR |
| ＋ |
－ |
＋ |
－ |
| Squamous carcinoma |
24
(38.1％) |
39
(61.9％) |
42
(66.7％) |
21
(33.3％) |
| Adenocarcinomas |
44
(66.7％) |
22
(33.3％) |
60
(90.9％) |
6
(9.1％) |
| Total |
68 |
61 |
102 |
27 |
ER、PR阳性表达的部位(核或浆)与组织学类型亦相关(表2)，即核的阳性表达多为鳞癌，而胞浆的阳性表达多见于腺癌，两者差异有显著性(P＜0.005)。
表2 ER、PR阳性表达的部位与肺癌组织学类型的关系
Tab 2 The relation between ER and PR positive
expression area and histological types of lung cancer
| Histology |
ER |
PR |
| Nucleus |
Cytoplasma |
Nucleus |
Cytoplasma |
| Squamous carcinoma |
19 |
5 |
37 |
5 |
| Adenocarcinomas |
12 |
32 |
34 |
26 |
| Total |
31 |
37 |
71 |
31 |
2.2.3 ER、PR阳性表达与肺癌预后的关系 ER阳性表达在生存率低于3年组和高于3年组中分别为42％(29／69)和56.4％(44／78)，PR阳性表达分别为78.3％(54／69)和75.6(59／78)，经统计学处理均无显著性差异(P＞0.05)。但在PR阳性组中，不同部位的阳性表达(核或浆)与预后相关，即PR细胞核阳性者预后差，而细胞浆阳性者预后好(P＜0.025)(表3)。
表3 PR阳性表达部位与肺癌预后的关系
Tab 3 The relation between PR positive
expression area and prognosis of lung cancer
| PR positive expression area |
Survival period |
| ＜3 years |
＞3 years |
| Nucleus |
34 |
28 |
| Cytoplasma |
9 |
22 |
| Total |
43 |
50 |
2.2.4 ER、PR阳性表达与肺癌的分化、分期、淋巴结转移的关系 ER在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期肺癌的阳性表达率分别为52.7％(39／74)、50％(5／10)、45.9％(28／61)，PR分别为78.4％(58／74)、60％(6／10)、77％(47／61)，经统计学处理均无明显差异(P＞0.05)。
ER在高、中、低分化组中的阳性表达率分别为77.8％(7／9)、51.8％(58／112)、30.8％(8／26)，高分化组的ER阳性率明显高于低分化组(P＜0.05)，但其他组间无明显差别(P＞0.05)。PR阳性表达率在高、中、低分化组中分别为66.7％(6／9)、81.3％(91／112)、61.5％(16／26)，三组间无明显差异(P＞0.05)。
ER在淋巴结转移组和非转移组的阳性率分别为44.3％(27／61)和53.5％(46／86)，PR分别为75.4％(46／61)和77.9％(67／86)，经统计学处理均无明显差异。3 讨论
关于p53蛋白阳性表达与临床病理及预后的关系，国内外已有较多报道。文献报道p53蛋白在肺癌组织中的阳性表达一般为50％～80％［3］，本组p53阳性表达率为61.2％，与多数文献报道结果相似。野生型p53因其代谢半衰期短，正常情况下一般不易检测到，而免疫组化检测的p53主要是错义突变的突变型p53蛋白［3］。关于p53蛋白过表达与肺癌预后的关系目前结论不一，多数学者认为p53蛋白阳性表达预示肺癌患者预后差［1，4，5］，亦有报道与预后无关［6］。本组研究结果表明，p53蛋白阳性表达与肺癌的组织学分型、分化程度、肿瘤分期及淋巴结转移等无关，但p53蛋白阳性表达与肺腺癌预后存在相关性，即p53蛋白阳性的肺癌患者3年生存率低、预后差，而p53蛋白阴性者预后好，这一结果与日本藤田结花［2］报道一致。因此我们认为用p53蛋白阳性表达判断肺腺癌的预后是很有价值的。
关于ER、PR在乳腺癌方面的研究已有较多报道，结论亦较一致。一般认为乳腺癌组织的ER、PR阳性表达是其预后好的标志，同时亦可指导乳腺癌术后治疗。但ER、PR在肺癌方面的研究报道不多，且结论存在争议。有人认为ER、PR阳性表达的肺癌患者术后5年生存率高于阴性表达者［7，8］，而有人认为ER、PR阳性表达的肺癌预后差，阴性表达者预后好［9］。上述文献报道显示ER、PR表达均与肺癌组织学类型无关。本组结果表明，ER、PR阳性与肺癌的预后无关，但在肺癌PR阳性表达组中，细胞核阳性者预后差，而细胞浆阳性者预后好，两者差异有显著性。此外，ER、PR阳性表达与肺癌组织学分型有关，在非小细胞肺癌的两大主要类型(鳞癌和腺癌)中，腺癌的ER、PR阳性表达率明显高于鳞癌，而且ER、PR不同部位(核或浆)的阳性表达与肺癌类型亦存在相关性，鳞癌以核阳性为主，腺癌以胞浆阳性为主，差异亦有显著性。因此我们认为ER、PR阳性表达有助于鳞癌和腺癌分型的鉴别，而ER、PR与肺癌分期、淋巴结转移等因素无关。
参考文献
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(收稿：1999-09-20， 修回：1999-12-10)
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