平阳霉素对大肠癌的抗肿瘤活性^＊

　　中国肿瘤临床1999年第26卷第10期

邓甬川　甄永苏　郑树　薛玉川

　　摘要　目的：观察平阳霉素(PYM)对大肠癌的活性。方法：应用小鼠结肠癌26瘤株皮下移植和盲肠原位移植模型及裸鼠移植瘤模型，以1/9半数致死量(LD₅₀)等毒性剂量观察PYM的抗瘤活性，并与丝裂霉素C(MMC)和5－氟脲嘧啶(5－FU)进行比较。结果：PYM对小鼠移植性结肠癌的作用明显较MMC和5－FU为强(P＜0.01)。两次实验结果：对盲肠移植瘤，PYM的抑瘤率为97％和100％，MMC为77％和25％，5－FU均为44％；对皮下移植瘤，PYM的抑瘤率为97％和91％，MMC为64％和25％，5－FU为46％和27％。同样PYM对裸鼠移植的人结肠癌HT－29的生长抑制作用也明显较MMC(P＜0.05)和5－FU(P＜0.01)为强，PYM的抑瘤率为79％，MMC为53％，5－FU仅12％。PYM治疗组动物的骨髓造血细胞未见减少。结论：PYM对小鼠移植性结肠癌(皮下和盲肠)和裸鼠移植的人结肠癌的生长均有明显的抑制作用，在1/9LD₅₀等毒性剂量下，其作用比MMC和5－FU强。

　　关键词：平阳霉素　盲肠肿瘤　结肠肿瘤　药物治疗

　　平阳霉素(PYM)为临床常用的抗肿瘤药物，对动物移植性肿瘤、裸鼠移植的人肿瘤均有明显的抑制作用，且PYM对骨髓很少损害，一般不引起白细胞减少，而且不抑制机体的免疫功能^[1]。本研究用小鼠移植性结肠癌(皮下和盲肠移植)、裸鼠移植的人结肠癌模型观察平阳霉素的疗效。

　　1　材料与方法

　　1.1　癌细胞系

　　人结肠癌HT－29来源于腺癌。小鼠结肠癌26瘤株^[2,3]由中国医学科学院药物研究所韩锐教授惠赠。

　　1.2　药物

　　平阳霉素(PYM)由中国医学科学院医药生物技术研究所许鸿章教授提供，丝裂霉素C(MMC)为日本协和发酵公司产品，5－氟脲嘧啶(5－FU)为天津人民制药厂产品。小鼠LD₅₀：PYM为180mg/kg，MMC为9mg/kg，5－FU为242mg^[4]。

　　1.3　小鼠移植性结肠癌26盲肠肿瘤实验治疗

　　取6～8周龄BALB/c小鼠，用乙醚麻醉后，切开腹壁和腹膜，在盲肠壁浆膜下注射接种结肠癌26细胞100万(0.02ml)，缝合腹膜和腹壁。接种后24小时随机分组并开始治疗，隔天一次肌肉注射给药，共10次。末次给药后24小时处死动物，剥出肿瘤称重，计算抑瘤率。

　　1.4　小鼠移植性结肠癌26皮下肿瘤实验治疗

　　取雌性6～8周龄BALB/c小鼠，将小鼠结肠癌26细胞按每鼠100万个细胞接种于小鼠右腋窝皮下，接种后24小时随机分组并开始治疗，以后处理同(1.3)。

　　1.5　裸鼠移植的人结肠癌治疗实验

　　实验方法参见文献[4]。

　　1.6　肿瘤组织病理学观察

　　检查各组肿瘤组织切片中未坏死部分肿瘤组织所占的比例和肿瘤细胞核分裂数，方法参见文献[4]。

　　1.7　骨髓有核细胞计数

　　末次给药后24小时，处死动物时取右股骨，计算每根股骨骨髓的有核细胞总数。

　　1.8　统计方法

　　采用F检验进行统计学处理，数据以均值±标准差(x±s)表示。

　　2　结果

　　2.1　PYM、MMC和5－FU对盲肠移植的小鼠结肠癌26的生长抑制作用比较

　　采用等毒性剂量进行比较，在分别相当于1/9LD₅₀的剂量下，以实验结束时的盲肠肿瘤重量进行比较。两次实验结果：PYM的抑瘤率为97％和100％，MMC为77％和25％，5－FU均为44％。表明PYM对小鼠结肠癌盲肠移植瘤的生长抑制作用明显较MMC和5－FU为强(P＜0.01，表1)。

　　表1平阳霉素、丝裂霉素C和5－氟脲嘧啶对小鼠结肠癌生长的抑制作用

实验组别	药物	动物数	皮下移植瘤		盲肠移植瘤
			重量(mg)x±s	抑制率(％)	重量(mg)x±s	抑制率(％)
Ⅰ	对照	9	854±151	—	557±112	—
	PYM	8	23±18	97**	14±30	97**
	MMC	8	311±105	64	159±43	77
	5－FU	8	459±118	46	310±148	44
Ⅱ	对照	6	900±386	—	517±221	—
	PYM	6	82±56	91**	0	100**
	MMC	5	674±270	25	388±258	25
	5－FU	6	657±322	27	289±136	44

　　各治疗组药物剂量为1/9LD₅₀等毒性剂量^**P＜0.01，PYM与对照、MMC和5－FU比较

　　2.2　PYM、MMC和5－FU对移植皮下的小鼠结肠癌26生长抑制作用的比较

　　采用1/9LD₅₀等毒性剂量，两次实验结果，PYM的抑瘤率为97％和91％，MMC为64％和25％，5－FU为46％和27％。表明PYM对小鼠结肠癌26的生长抑制作用也明显较MMC和5－FU为强(P＜0.01，表1)。

　　2.3　PYM、MMC和5－FU对裸鼠移植的人结肠癌HT－29的抑制作用比较

　　在分别相当于1/9LD₅₀剂量下，PYM的抑瘤率为79％，MMC为53％，5－FU仅12％。表明PYM对裸鼠移植的人结肠癌的生长抑制作用明显较MMC(P＜0.05)和5－FU(P＜0.01)为强(表2)。

　　表2平阳霉素、丝裂霉素C和5－氟脲嘧啶对裸鼠移植的人结肠癌HT－29生长的抑制作用

药物	动物数	肿瘤		未坏死肿瘤组织
		重量(mg)x±s	抑制率(％)	比例	重量(mg)x±s	抑制率(％)
对照	5	804±173	—	0.65**	523±116	—
PYM	5	172±78	79	0.33	57±26	89
MMC	5	376±174	53*	0.57**	221±101	58*
5－FU	5	707±168	12**	0.65**	466±99	12**

　　各治疗组药物剂量为1/9LD₅₀等毒性剂量与PYM比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

　　2.4　病理组织学检查

　　2.4.1小鼠结肠癌26病理组织学检查对照、MMC和5－FU组肿瘤细胞生长旺盛，可见肿瘤细胞从浆膜层穿破肌层，浸润粘膜下层。而PYM组肿瘤细胞密度较低，未见肿瘤组织浸润到粘膜下层，也未在肠系膜淋巴结发现有肿瘤转移。

　　2.4.2PYM、MMC和5－FU对裸鼠移植的人结肠癌HT－29肿瘤细胞有丝分裂的影响对照、MMC和5－FU组检查10个高倍视野中的肿瘤细胞核分裂数分别为104±12、130±17和107±12，而PYM组的核分裂数为53±15，相当于对照组的51％，与对照、MMC和5－FU组相比均有明显差别(P＜0.01)。

　　2.4.3PYM、MMC和5－FU对裸鼠移植的人结肠癌HT－29肿瘤组织中未坏死肿瘤组织比例的影响

　　对照、MMC和5－FU组肿瘤细胞密集，残存未坏死肿瘤组织所占比例较大，PYM治疗组肿瘤出现大片坏死，残存未坏死部分肿瘤比例明显减少(P＜0.01，表2)。

　　2.5　PYM、MMC和5－FU对带瘤小鼠骨髓有核细胞数影响的比较

　　在1/9LD₅₀等毒性剂量下，PYM对结肠癌26带瘤小鼠的骨髓造血细胞无影响，骨髓有核细胞数相当于对照组的93％，与对照组相比无明显差别(P＞0.05)，而MMC和5－FU组骨髓有核细胞数均明显减少，分别相当于对照组的40％和43％(P＜0.01，表3)。

表3平阳霉素、丝裂霉素C和5－氟脲嘧啶对带瘤小鼠骨髓有核细胞数的影响

实验组别	药物	剂量（mg/kg）	动物数	骨髓有核细胞数(106/股骨)
				±s	(％)
Ⅰ	对照	—	6	13±3	100
	PYM	20	6	11±2	85
	MMC	1	5	7±2	54**
	5－FU	27	6	7±2	54**
Ⅱ	对照	—	9	12±3	100
	PYM	20	8	12±2	100
	MMC	1	8	3±1	25**
	5－FU	27	8	4±1	33**

　　各治疗组药物剂量为1/9LD₅₀等毒性剂量^**P＜0.01

　　3　讨论

　　大肠癌是目前对化疗药物较不敏感的肿瘤之一，5－FU和MMC被认为是治疗大肠癌较有效的药物^[5]。本研究将小鼠结肠癌26细胞种植到小鼠盲肠壁浆膜下，使其在盲肠形成实体瘤，实验中对照组小鼠盲肠均见肿瘤生成，且形成的肿瘤能从浆膜层向粘膜下层浸润，并转移到肠系膜淋巴结。盲肠移植瘤比皮下移植瘤更接近人大肠癌在体内生长和病变发展情况及病理改变，该模型更能反映药物对大肠癌的治疗效果，并兼顾了药物分布和代谢等因素，是较适用于评价药物疗效的大肠癌原位移植模型。本研究证实PYM不仅对小鼠结肠癌皮下移植瘤而且对盲肠移植瘤均有非常明显的生长抑制作用，在等毒性剂量下，PYM的作用均明显强于MMC和5－FU。在治疗组，PYM对骨髓造血细胞无影响，而MMC和5－FU出现较明显的骨髓毒性。

　　本研究用裸鼠肿瘤移植模型将PYM与临床常用治疗大肠癌的药物进行比较，同样在等毒性剂量下，PYM对裸鼠移植的人结肠癌HT－29生长的抑制作用也明显较MMC和5－FU强，并使肿瘤组织出现广泛坏死。本研究结果表明PYM对小鼠移植性结肠癌以及在裸鼠移植的人大肠癌的生长均有明显的抑制作用，同时对造血无明显影响，提示用PYM治疗大肠癌的可能性，尤其适用于机体免疫和骨髓造血系统受到损害的大肠癌患者的治疗。

　　＊本文课题受国家自然科学基金资助(93090012－03)

　　作者单位：邓甬川　甄永苏　郑树　浙江医科大学肿瘤研究所(杭州市310009)

　　薛玉川　中国医学科学院医药生物技术研究所

　　参考文献

　　1 Zhang H,Zhen YS. Pingyangmycin shows no inhibition on the restoration of depressed hemopoiesis and immune function in mice treated with cyclophosphamide. proc CAMS PUMC,1987;2(4):202～ 6

　　2 Van der Wilt CL,Pinedo HM,Smid K,et al. Elevation of thymidylate synthase following 5－ fluorouracil treatment is prevented by the addition of leucovorin in murine colon tumors.Cancer Res,1992;52(18):4922～ 8

　　3 Peters GJ,Lankelma J,Kok RM,et al. Prolonged retention of high concentrations of 5－ fluorouracil in human and murine tumors as compared with plasma.Cancer chemother Pharmacol,1993;31(4):269～ 76

　　4 邓甬川,甄永苏,郑树,等.博来霉素A6对裸鼠移植的人体大肠癌的抑制作用.中国医学科学院学报,1990;12(5):335～40

　　5 Imaizumi M,Kondo T,Taguchi T, et al. A standardized method of using nude mice for the in vivo screening of antitumor drugs for human tumors.Surg today,1993;23(5):412～ 9

(韩豫生校对)

　　(1998－08－11收稿)(1999－03－16修回)