41例胃癌标本HPV16，18感染状况研究

肿瘤防治杂志 2000年第2期第17卷 基础与临床研究

作者：郭亮　罗兵　牟莹心　沈爱玲　陈晓光　杨德胜

单位：郭亮　牟莹心　沈爱玲　陈晓光　杨德胜(山东省青岛市人民医院检验科　青岛市　266001)；罗兵(山东省青岛大学医学院基础部微生物教研室　青岛市　266001)

关键词：胃癌；HPV16/18；聚合酶链反应

　　【摘要】目的：对本地区胃癌病人中人乳头瘤病毒(HPV)的感染状况做一调查研究。方法：采用PCR技术对41例新鲜胃癌组织中HPV16和18型病毒的感染进行检测。结果：41例新鲜胃癌组织中HPV16型阳性率为4.88%(2/41)；HPV18型阳性率为9.76%(4/41)；两型合计阳性率为14.64%。结论：本地的HPV16和18型病毒的感染率与文献报道的比较居中等水平，没有两型病毒双重感染的结果与文献报道一致。

　　中图分类号：R730.231；R735.2　　文献标识码：A　　文章编号：1009-4571(2000)02-0141-02

Study of infected HPV16/18 of the 41 case stomach neoplasm state

GUO Liang,LUO Bing，MU Ying-xin，et al.

　　(Clinical laboratory,People's Hospital Of Qingdao Shandong Province.Qingdao 266001)

　　【Abstract】Objective:Study of infection HPV16/18 of the stomach neoplasma in this region.Methods:Analysis 41 case fresh stomach cancer tissue HPV infected by PCR.Results:One case HPV16 and one HPV18 are positive in 41 stomach cancer,the ratio HPV16 is 4.88% and HPV18 is 9.76%.The total is 14.64%.Conclusions:PHV16 and 18 infected ration is in middle level in this area compared with document record.Double infection of two types of virus is in the same level with document record.

　　【Key words】stomach neoplasma;HPV16/18;PCR

　　胃癌患者同时感染人乳头瘤病毒16、18型(HPV human papillomavirus)的比例报道不一，高者达27%；低者为零^［1～3］。Saegusa和strickler 报道的胃癌标本中HPV16的检出率为零，董为国等检测HPV16/18型的检出率为27%，于皆平等检测新鲜及石蜡包埋的胃腺癌标本中HPV型的检出率为22.72%，Key也认为HPV与胃癌的发生有一定的关系^［4，5］。为弄清本地区胃癌患者HPV16/18型病毒的情况，我们采用PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链反应)方法，使用16/18型病毒E6～E7区的引物，对手术切除的新鲜胃癌标本进行检测，观察其中HPV病毒感染情况。

　　1　材料与方法

　　1.1　标本

　　41例胃癌标本均为手术切除的新鲜肿瘤组织，收集自青岛大学医学院附属医院、青岛市立医院和青岛人民医院。将新鲜肿瘤组织用无菌研钵研磨均匀后，以Hank's液洗2次，移入EP管中，加入裂解缓冲液，其中所含蛋白酶K终浓度为200　mg/ml,55℃，4　h，然后用酚、氯仿、异戊醇法常规提取DNA，用乙醇沉淀干燥后，加入50　μl重蒸水溶解，-20℃保存用作PCR模板。

　　1.2　材料

　　dNTP等购自Promega公司。

　　1.3　引物

　　为E6开放读码框架的一段序列，按参考文献^［6，7］设计，由北京塞百盛公司合成。引物序列如下。

　　HPV16　5’-GAATCCATATGCTGTATGATAA-

　　AT-3’，5’-GATGATCTGCAACAAGACATACATC-3’；HPV18 5’-CACGGCGACCCTACAAGCTACGG-3’，5’-TGCAGCACGAATGGCACTGGCCTC-3’。

　　1.4　实验方法

　　检验方法采用PCR，PCR反应体积为30　μl，扩增条件为94℃预变性5　min;94℃30　s,56℃30　s,72℃　60　s;共35　cycles;72℃　5　min。扩增产物用琼脂糖凝胶电泳检测，HPV16的扩增片段长258　bp,HPV18的扩增片段长405　bp，出现这两种扩增片段的视为阳性。

　　2　结果

　　41例手术切除的新鲜胃癌标本中，HPV16阳性的有2例，分别是2、31号标本，HPV16的阳性率为4.88%；HPV18阳性的有4例，分别是9、12、29、37号标本，HPV18的阳性率为9.76%；合计HPV16和HPV18的阳性率为14.64%。在41例标本中没有HPV16和HPV18两型的双重感染。

　　3　讨论

　　胃癌是我国高发的恶性肿瘤之一。山东省尤其是胶东半岛是胃癌的高发区，开展胃癌病因的研究，对胃癌的防治无疑是十分有益的。在很多癌症标本中都发现有HPV病毒，一些专家推论其与某些肿瘤的发生、发展有一定的关系，如肺、食管、直肠、膀胱、肾、皮肤、乳腺等组织的恶性肿瘤，尤其是宫颈癌的发生、发展与HPV病毒关系密切^［3］。HPV病毒是环状的双链DNA病毒，基因组长8　kb,主要感染人类的多种上皮细胞，导致皮肤和粘膜的良恶性上皮增生。目前已发现的HPV病毒共有60余型，其中大部分不导致或极少导致恶性肿瘤。以前的观点认为，HPV病毒主要与泌尿生殖系统的上皮恶性肿瘤相关，目前认为其与前述的很多组织器官上皮肿瘤有关。据资料报道，与恶性肿瘤相关的主要是HPV16和18型，且16型在恶性肿瘤中的检出率更高，而HPV6和11型则很少导致浸润性癌，被认为是低危因素。HPV16基因是断裂基因，大部分病毒阳性肿瘤都含有整合的V-DNA，这种病毒附着体是在特定区域(E20RF)断裂而整合，在染色体内的定位无一定的模式，只有极少数目的恶性肿瘤没有V-DNA的整合。HPV病毒高危型别的E6和E7基因组在体外组织培养转染后，可使人类的包皮细胞、宫颈角质细胞和上皮细胞永生化。同时其染色体可规律性地表现出不稳定性，在HPV16和HPV18型阳性的临床损害中，已出现非整倍体现象，这些情况的进一步发展就产生了恶性肿瘤。

　　我们所见的文献报道都是HPV16型的检出率明显高于HPV18型，但是在我们的资料中则是HPV18型的检出率高于HPV16型。是本地的HPV病毒感染情况就是如此，还是因病例少的缘故，有待进一步的研究探讨。此外，我们的资料中，HPV16的阳性率为4.88%；HPV18的阳性率为9.76%；两型合计的阳性率为14.64%。与文献比较，这一比率为中等感染率，出现这一结果可能是本地HPV流行的情况所致。另外，HPV16和18两型病毒没有重复感染，此结果也与文献报道相符。

　　参考文献：

　　［1］董为国，于皆平，罗和生，等.人类乳头瘤病毒HPV16、18型感染与胃癌发生的关系［J］.世界华人杂志，1999，7(1)：46-48.

　　［2］Saegusa M,Hashimura M,Takano y et al,Absence of human papillomavirus genomic sequences detected by the polymerase chain reaction in esophageal and gastric carcinomas in Japan ［J］.Mol.Pathol,1997,50(2):101-104.

　　［3］Strikler HD,Schiffman MH,Shah Kv et al,A survey of human papillomavirus 16 antibodies in patients with epithelial cancers ［J］.Eur.J.Cancer Prev,1998,7(4):305-313.

　　［4］于皆平，邓涛，于红刚，等.人乳头瘤病毒16与胃癌相关性的研究［J］.中华消化内镜杂志，1999，16(1)：30-32.

　　［5］Key T,Micronutrients and cancetr aetiology,the epidemiological evidence.［J］.Proc.Natr.Soc,1994,53(3):605-614.

　　［6］Kinoshita M,Shin S,Aono T.A sensitive and quantitative method for the determination of number of HPV 16 DNA copies by using the competitive PCR［J］，GATA，1993，10(5)：116-121.

　　［7］Evander M,Boden E,Bjersing L,et al.Oligonucleotide primers for DNA amplification of early regions 1,6 and 7 form human papillomavirus type 6,11,16,18,31 and 33［J］.Arch Virol,1991,116(1-4):221-233.

收稿日期：1999-09-17

修回日期：1999-10-18