胃癌细胞异位分泌人绒膜促性腺激素对微血管密度的影响

中华肿瘤杂志 1998年第5期第0卷 基础研究

作者：张文远　杨红　韩盛玺　文锦

单位：610072 成都，四川省人民医院消化科(张文远、韩盛玺)，病理科(杨红、文锦)

　　关键词： 促性腺激素，绒毛膜/分泌　　胃肿瘤/分泌　　胃肿瘤　　人绒膜促性腺激素　　胃肿瘤/病理学　　毛细血管/病理学

　　【摘要】　目的　研究胃癌组织中人绒膜促性腺激素(HCG)对微血管密度(MVD)的影响。方法运用S-P法，对40例胃癌手术切除标本进行抗人β-促绒膜性腺激素(β-HCG)多克隆抗体和抗因子F_Ⅷ相关抗原抗体(F_ⅧRAg)免疫组织化学染色，观察癌组织、癌旁、正常组织各区域β-HCG的表达和MVD。结果　所有胃癌组织中，β-HCG仅在癌细胞内阳性表达，表达率为37.5%(15/40)。MVD在癌组织为27.4±7.1，癌旁为11.9±5.4，正常组织为4.8±1.5(P＜0.05～0.01)。β-HCG阳性组的MVD明显高于β-HCG阴性组(P＜0.05)，β-HCG，MVD和组织类型无关(P＞0.05)，但β-HCG和淋巴结转移有关(P＜0.05)，伴有血道转移组的β-HCG，MVD均高于不伴血道转移组(P＜0.05)。结论　微血管生长与肿瘤的生长，血道转移有关，而HCG对肿瘤的微血管有一定的促生长作用。

　　The effect of ectopic HCG on microvessel density in gastric carcinoma　　Zhang Wenyuan, Yang Hong, Han Shengxi, et al. Department of Gastroenterology, Sichuan Provincial People's Hospital, Chengdu 610072

　　【Abstract】　Objectives　To study the effect of ectopic HCG on microvessel density in gastric carcinoma using immunohistochemical staining with anti-β-HCG polyclonal antibody and anti-factor Ⅷ related antigen(F_Ⅷ RAg)antibody. Methods　A total of 40 specimens resected from patients with gastric carcinoma was investigated by immunohistochoemical staining with a anti-β-HCG polyclonal antibody and a monoclonal antibody against F_ⅧRAg. The expression of β-HCG and the microvessel density(the average number of microvessel in three areas of highest vascular density at 400× magnification) in various regions of the histologic specimens were studied. Results　Fifteen (37.5%) of the 40 gastric carcinomas was positive for β-HCG protein in tumor tissue. β-HCG protein was negative in the tumor-adjacent and in normal tissue. The mean microvessel density was 27.4±7.1 in the tumor, 11.9±5.4 in tumor-adjacent and 4.8±1.5 in normal tissues (P＜0.05～0.01). There was a close correlation with β-HCG positivity and microvessel density (MVD). There was no correlation between the degree of tumor cell differentation and β-HCG expression, nor was a correlation between it and MVD. High expression level of β-HCG and MVD was significantly associated with hematogenous metastases. Conclusion　Ectopic HCG expression may have angiogenic effect which, in turn, may facilitate hematogenous dissemination of gastric cancer.

　　【Subject words】　Gonadotropins, chorionic/secretion　　Stomach neoplasms/secretion　　Stomach neoplasms/pathology　　Capillaries/pathology

　　部分胃癌细胞具有分泌异位人绒膜促性腺激素(HCG)的特性，并易发生血道转移^［1］，这和恶性滋养层细胞肿瘤的特点具有极相似性，但人们并未在胃癌细胞中发现滋养层细胞成分^［2］。近年的研究表明，肿瘤的恶性行为和血道转移与微血管密度(microvessel density, MVD)有关^［3］。为此，我们用β-促绒膜性腺激素(β-HCG)和F_Ⅷ相关抗原抗体免疫组化染色，观察了胃癌组织不同部位β-HCG的阳性表达和MVD，以探讨β-HCG对MVD的影响。

材料和方法

　　1.临床资料：我院1996年1月～1997年7月胃癌手术切除标本40例。患者年龄为32～78岁，平均55.6岁。男性29例，女性11例。全部患者术前均未接受化疗或放疗。以全国胃癌协作组病理组规定标准作为病理诊断和分级标准，分期采用统一的国际INM新分期标准。在研究中，将肿瘤分成两个组织学亚型：分化型，包括乳头状腺癌和管状腺癌，共14例；未分化型，包括分化不良型腺癌、印戒细胞癌和粘液细胞癌，共26例，其中血道转移(肝转移)8例。避开出血及坏死区，每例在癌细胞区、癌与正常组织交界(癌旁)区、正常组织区各取一部分，用10%福尔马林固定，常规脱水，透明，浸蜡，包埋，4 μm连续切片，一张做HE染色，用于重新确认，余切片作免疫组化。

　　2.主要试剂：F_Ⅷ因子相关抗原抗体(工作浓度1∶50)和S-P试剂盒为Zymed公司产品，抗人β-HCG相关抗原抗体(工作浓度1∶250)由Dako公司生产，DAB为Fluka公司产品。

　　3.方法：微血管和β-HCG染色用S-P免疫组化法，微血管呈棕黄色，计数方法为每张切片选择3个血管最高的区域，在高倍镜(10×40)下进行计数，求其平均数，β-HCG染色为细胞浆呈棕黄色。

　　微血管判断标准：凡是染成棕黄色、数个内皮细胞或内皮细胞簇，均作为一个血管计数；凡管腔＞8个红细胞大小，带有较厚肌层的血管，均不计数。

　　β-HCG结果判断：镜下胞浆呈棕黄色，每个高倍视野计数100个细胞，阳性细胞＜5%为(-)，≥5%为(+)。

　　4.统计处理：微血管计数以±s表示，组间比较用F检验，两均数比较用t检验，计数资料用χ²检验。

结果

　　1.胃癌不同区域β-HCG表达和MVD分布：由表1可见，β-HCG仅在癌组织内表达，而癌旁和正常组织区无一例阳性表达，组间比较，差异有显著性(P＜0.01)。F_Ⅷ免疫组化染色结果显示，癌组织内微血管形态不规整，分布呈异质性，由7～78个不等，在一些癌的溃疡边缘处，微血管呈簇状分布，部分呈发芽状，癌周的MVD明显高于癌中央。癌旁组织MVD逐渐减少，管腔相对规整，但分布不均匀。正常组织区微血管分布较少而均匀，组间比较差异有显著性(P＜0.05～0.01)。

表1　40例胃癌不同区域β-HCG表达和

　　MVD(±s)分布比较

　　^*与正常区比较，P＜0.05　　^**与癌旁区比较，P＜0.01

　　2.β-HCG与MVD的关系：由表2可见，β-HCG阳性表达组MVD大于阴性组，无论是癌区或癌旁，差异均有显著性(P＜0.05)；组织类型和β-HCG、MVD无关(P＞0.05)；淋巴结转移与β-HCG有关(P＜0.05)；8例血道转移的胃癌，β-HCG和MVD均明显高于无血道转移组(P＜0.05)。在正常组织区，所有因素的MVD差异均无显著性(P＞0.05)。

讨论

　　本研究结果表明，β-HCG仅在癌细胞内存在(37.5%)，在癌旁和正常组织无一例阳性表达，说明胃癌细胞确有分泌HCG的能力，它的表达和组织类型无关(P＞0.05)，但和淋巴转移、血道转移关系密切(P＜0.05)，这和Rau等^［4］研究的结果相一致。我们对胃癌微血管的研究显示，胃癌不同部位MVD极不相同，以癌组织为最高，血管形态不规整，分布不均，在一些癌性溃疡的边缘可见簇状的微血管，部

表2　β-HCG与MVD的关系

　　^*两组比较，P＞0.05　　^**两组比较，P＜0.05分呈发芽状，显示出明显的异质性。癌旁组织内微血管相对规整，但分布不均。正常组织内微血管形态规整，分布均匀。三者之间差异有显著性(P＜0.05～0.01)。同样，MVD和组织类型无关，但伴有血道转移组的MVD明显高于不伴血道转移组(P＜0.05)。这和Maeda等^［5］的报道相符，说明肿瘤在生长过程中确有异常的微血管形成，这些新生的异常血管有裂隙状基底膜，并呈渗漏状态，从而它们比正常成熟血管容易被肿瘤细胞穿透，这是导致血道转移的有力提示。

　　本实验结果显示，胃癌细胞异位分泌HCG对胃癌的微血管形成有一定影响。在胃癌β-HCG表达阳性组，MVD明显高于阴性组(P＜0.05)，无论是癌组织或癌旁均是如此。在伴有血道转移的胃癌中，MVD、β-HCG的表达均高于不伴血道转移组(P＜0.05)，表现出β-HCG和MVD的相一致性。只是在淋巴结转移组中，β-HCG和MVD不一致，这是否和β-HCG作用的多样性有关尚待研究。

　　关于HCG的来源，Shah等^［6］提出是起源于生殖细胞网，并认为肿瘤细胞出现HCG是异位的绒毛成分，肿瘤可能是单纯的绒癌或未分化癌有绒癌成分。本实验也未发现滋养层细胞成分或巨细胞，因此我们同意这种观点，和绒癌无关。有人提出，肿瘤细胞产生HCG起源于多潜能的干细胞，因此，含HCG的肿瘤往往恶性度高^［7］。这与本实验结果不一致，因为在我们的实验中，β-HCG的表达和组织类型无关。Camp等^［8］还提出，肿瘤细胞含HCG可能是成人组织的胚胎基因的不完全抑制，在肿瘤组织中这种脱抑制可更广泛严重的发生。因此，对HCG来源的认识，目前仍属模糊。

　　胃癌细胞异位分泌HCG，如何影响肿瘤的微血管，其机理目前仍不十分清楚。根据Sporn的观点^［9］，胃癌激素有自分泌、旁分泌两种形式。所谓自分泌，是肿瘤细胞产生的激素或生长因子，和其自身膜表面功能受体相结合，刺激自身生长；旁分泌是指肿瘤细胞产生的激素或调节因子，通过细胞间隙对邻近的其他种类细胞起促进作用。HCG是直接作用于胃癌细胞的分化、增殖，通过肿瘤组织在增生过程中产生一些促血管因子而作用于胃癌微血管，还是HCG直接作用于肿瘤微血管内皮细胞，目前不十分清楚。本实验结果更倾向于后者。探寻胃癌细胞或肿瘤微血管内皮细胞HCG结合位点，并给予拮抗，观察其对肿瘤微血管的影响，有助于阐明HCG对微血管的作用机理，为研究肿瘤的生物学行为和临床治疗提供一个新的信息。

参考文献

　　1Webb A, Scott MP, Norman A, et al. The prognostic value of serum and immunohistochemical tumor markers in advanced gastric cancer. Eur J Carcer, 1996, 32A: 63-68.

　　2孙燕妮，贾春英，徐庆中. 胃癌细胞含异位HCG的免疫组织化学研究. 中华病理学杂志，1993，22：33-35.

　　3Nobuhiko T, Hirokazu A, Mitsuyoshi M, et al. Extent of tumor vascularization correlates with prognosis and hematogenous metastasis in gastric carcinomas. Cancer Res, 1996,56: 2671-2676.

　　4Rad U, Below C, Haensch W, et al. Significance of serum beta-HCG as a tumor marker for stomach carcinoma. Langenbe cks-Arch-Chir, 1995, 380:359-364.

　　5Maeda K, Chung YS, Takatsuka S, et al. Tumor angiogenesis as a predictor of recurrence in gastric carcinomas. J Clin Oncol, 1995, 13:477-482.

　　6Shah VM, Newman J, Crocker J, et al. Ectopic β-human chorionic gonadotropin production by bladder urothelial neoplasm. Arch Pathol Lab Med, 1986, 110: 107-111.

　　7Yoshmoto Y, Wolfsen AR, Odeu WD, et al. Qualitative and quantitative analyses of human chorionic gonadotropin and its subunits produced by malignant tumor. Cancer, 1978, 42:692-696.

　　8Camp E, Palacin A, Bennasco C, et al. Human chorionic gonadotropin in colorectal carcinoma. Cancer, 1987,59: 1611-1616.

　　9Sporn MB. Autocrine secretion and malignant transformation of cells. N Eng J Med, 1980, 303:878-880.

(收稿：1997-12-03　　修回：1998-01-13)