CD44剪接变异体6在胃癌的表达及意义
中华普通外科杂志2000年第15卷第7期
于吉人 郑树森 邬一军 沈岩 沈倩云
摘要 目的：探讨CD44v6表达与胃癌生物学行为及转移的关系。方法：应用免疫组织化学方法检测 cD44v6在205例胃癌组织中的表达。结果：胃癌 cD44v6表达阳性率为47.3%（97/205）。分化型胃癌的v6阳性率为67.4%（58/86），未分化型胃癌的阳性率为32.8%（39/119），两者差异有显著性（χ2=22.70, p＜0.001）。v6的表达在静脉侵犯组为53.6%（67/125），较无静脉侵犯组（37.5%，30/80）为高（χ2=4.45, p＜0.05）。肝转移组的v6阳性率为70.2%（33/47），明显高于无肝转移组（40.5%，64/158）（χ2＝11.66, p＜0.001）。结论：CD44v6对胃癌的血源性转移起重要作用。
关键词：胃肿瘤 免疫组织化学
CD44是一种细胞粘附分子，至少由20个外显子组成。这些外显子易被剪接（splice）而形成许多变异体（variant）［1］。许多研究表明某些变异体存在于肿瘤组织和肿瘤细胞株，并且能促进肿瘤生长和转移。本研究应用免疫组织化学方法检测 cD44剪接变异体 6（CD44v6）在胃癌组织中的表达并探讨其临床意义。
材料与方法
1.临床资料：1984年至1993年间手术治疗的205例进展期胃癌患者中，男120例，女85例，平均年龄60岁。所取肿瘤标本用10%甲醛固定和石蜡包埋。按日本胃癌研究会规约判断胃癌临床病理特征［2］。按1997年 uICC分期标准进行 TNM分期［3］。
2.免疫组织化学染色:采用链菌素-过氧化物酶法,按说明书进行染色。用已知阳性切片作阳性对照,用缓血酸胺缓冲液（tris-buffered saline, TBS）代替一抗作阴性对照。一抗为鼠抗 CD44v6单克隆抗体（奥地利Bender公司）。细胞浆染成棕黄色为阳性，阳性细胞占肿瘤细胞的25%以上为阳性，小于25%为阴性。
3.统计学方法：采用χ2检验，术后累积生存率分析用Kaplan-Meier法并用 log-rank法检验各组的差异。
结果
1. CD44v6表达:在205例胃癌组织表达的阳性率为47.3%（97/205），与临床病理特征的关系见表1。在不同浸润深度，淋巴结转移，淋巴管侵犯及腹膜转移的胃癌间， cD44v6的表达差异无显著性（P＞0.05）。 v6在分化型胃癌的表达明显高于未分化型胃癌（χ2=22.70, p＜0.001），而且与静脉是否侵犯密切相关（χ2=4.45, p＜0.05）。
表1 临床病理特征与CD44v6表达的关系
| 病理特征 |
总例数 |
CD44v6阳性 |
| 例数 |
% |
| 组织学类型 |
|
|
|
| 分化型 |
86 |
58 |
67.4△ |
| 未分化型 |
119 |
39 |
32.8 |
| 浸润深度 |
| T2 |
93 |
48 |
51.6 |
| T3 |
89 |
36 |
40.4 |
| T4 |
23 |
13 |
56.5 |
| 淋巴结转移 |
|
|
|
| 阴性 |
42 |
17 |
40.5 |
| 阳性 |
163 |
80 |
49.1 |
| 淋巴管侵犯 |
|
|
|
| 阴性 |
23 |
14 |
60.9 |
| 阳性 |
182 |
83 |
45.6 |
| 静脉侵犯 |
|
|
|
| 阴性 |
80 |
30 |
37.5* |
| 阳性 |
125 |
67 |
53.6 |
| 腹膜转移 |
|
|
|
| 阴性 |
139 |
70 |
50.4 |
| 阳性 |
66 |
27 |
40.9 |
注：△χ2=22.7，P＜0.001，*χ2=4.45，P＜0.05，其余P＞0.05 2. CD44v6表达与胃癌肝转移的关系:47例肝转移中 v6阳性 33例（70.2%），而无肝转移的158例胃癌中 v6阳性64例（40.5%），二者差异有显著性（χ2=11.66，P＜0.001）。尤其是在分化型胃癌，肝转移者v6阳性率（83.3%，25/30）明显高于无肝转移者（58.9%，33/56）（χ2=4.25，P＜0.05）。
3.CD44v6表达与 5年生存率:本组Ⅰ期 28例，Ⅱ期35例，Ⅲ期48例，Ⅳ期 94例, CD44v6阳性数分别为 12、 21、 19和45例，差异无显著性（χ2=3.66,P＞0.05）。v6阳性组和阴性组的术后5年累积生存率分别为38.5%和 41.5%，二者差异无显著性（χ2=0.62,P＞0.05）。
讨论
CD44是细胞表面的一种糖蛋白，广泛存在于白细胞、上皮细胞和内皮细胞上，起着上皮细胞之间的相互粘连功能。 cD44剪接变异体如v5、v6、v9在各种人肿瘤组织中均有高表达。Heider等［4］发现肠型胃癌和肠上皮化生均表达 v5和 v6而弥漫型胃癌主要表达 v5。本研究结果表明，CD44v6在分化型胃癌的表达明显高于未分化型胃癌，提示 v6可作为分子标记物来区别这两种类型的胃癌，同时亦支持这两种胃癌可能源于不同的癌前病变和以不同的方式发展的理论。
CD44变异体的功能仍不很清楚。在大鼠细胞， CD44v6能将转移的潜能转导给胰腺癌细胞株，并且这种潜能可被抗 cD44抗体所阻断［5］。在乳腺癌、大肠癌和宫颈癌细胞， cD44v6的表达与肿瘤发展、淋巴结转移和预后有关，而且在转移的淋巴结中亦有 v6的表达。亦有研究表明 CD44v9与胃癌的远处转移、肿瘤复发和死亡率有关［6］。本研究结果表明有肝转移的患者中，大多数（70.2%）表现为 v6阳性，尤其是在分化型胃癌，肝转移者 v6表达的阳性率达83.3%，明显高于无肝转移者。因此，我们认为粘附分子 CD44v6对胃癌的血源性转移起着主要作用。术前或术后对胃癌组织进行 cD44v6的检测，有助于对肿瘤生物学特征作出准确的判断，指导术后的病情监测和辅助治疗。
作者单位：于吉人（310003杭州，浙江医科大学附属第一医院普外科)
郑树森（310003 杭州，浙江医科大学附属第一医院普外科）
参考文献
1 Screaton GR, Bell MV, Jackson DG,et al. Genomic structure of DNA encoding the lymphocyte homing receptor CD44 reveals at least12 alternatively spliced exons. Proc Natl Acad Sci USA, 1992, 89: 12160-12164.
2 Japanese Gastric Carcinoma Association. Japanese classification of gastric carcinoma. Gastric Cancer, 1998, 1: 10-24.
3 Roder JD, Bottcher K, Busch R,et al. Classification of regional lymph node metastasis from gastric carcinoma.Cancer, 1998, 82: 621-631.
4 Heider KH, Dammrich J ,Skroch-Angel P, et al. Differential expression of cD44 splice variants in intestinal-and diffuse-type human gastric carcinomas and normal mucosa. Cancer Res, 1993, 53: 4197-4203.
5 Günthert U, Hofmann M, Rudy W, et al. A new variant of glycoprotein CD44 confers metastasis potential to rat carcinoma cell. Cell, 1991, 65: 13-24.
6 Mayer B, Janch KW, Gunthert U, et al. De-novo expression of CD44 and survival in gastric cancer. Lancet, 1993, 342: 1019-1022.
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