细胞凋亡与早期胃癌淋巴结转移关系的初步研究

中国胃肠外科杂志 1999年第4期第2卷 论著

作者：徐志成　刘统成　周振宇　钟文智　刘作江

单位：广东省公安厅边防局深圳医院

　　关键词： 细胞凋亡；淋巴结转移；胃肿瘤

　　【摘要】　目的　研究细胞凋亡与早期胃癌淋巴结转移的关系。方法　利用DNA3'-羟基末端标记法对12例早期胃癌组织的肿瘤细胞凋亡率进行测定，对淋巴结转移阳性组和阴性组测定的结果进行对比研究。结果　淋巴结转移阳性组的肿瘤细胞凋亡率比阴性组明显增高(P＜0.01)。结论　肿瘤细胞凋亡率与早期胃癌淋巴结转移密切相关，但能否作为临床上预测胃癌淋巴结转移的指标，尚须作进一步的研究。

A primary study on the relationship between apoptosis and

　　in early gastric cancer

XU Zhicheng, LIU tongcheng, ZHOU Zhenyu, et al. First Department of Surgery, Guangdong Frontier guard Hospital, Shenzhen 518029

　　【Abstract】　Objective　To study the relationship between apoptosis and the situation of lymph node metastasis in early gastric cancer.Methods　Apoptosis was detected in 12 cases of early gastric cancer. Comparative study was performed between the lymph node metastasis positive group and negative group.Results　Apoptotic index (AI: percentage of apoptotic cells in cancerous cells)in lymph node metastasis positive group is higher than that in negative group (P＜0.01). conclusion　Apoptosis is closely related to the situation of lymph node metastasis in early gastric cancer, but it is uncertain whether it can be used as a predictor in clinical practice up to now.

　　【Kew words】　Apoptosis　Lymph node metastasis　Stomach neoplasm

　　细胞凋亡（apoptosis）是生命不可缺少的组成部分。近年来，人们越来越深刻地认识到，肿瘤的发生和转移不仅是因为细胞增殖速率很高，而且与细胞凋亡速率密切相关，细胞凋亡参与了癌症的起始过程，并决定着肿瘤的生物学行为^［1］。我们采用DNA3'-羟基末端标记法对12例早期胃癌组织中肿瘤细胞凋亡情况进行测定，从中探讨它与早期胃癌淋巴结转移的关系及临床意义。

　　材料与方法

　　一. 标本来源

　　12例早期胃癌标本选自1987 ～1998年间经我院手术切除及术后确诊的病例，其中男性7例，女性5例，平均年龄50.2岁。早期胃癌淋巴结转移阳性组（以下简称LN⁺组）和淋巴结转移阴性组（以下简称LN^-组）各6例。胃癌根治术切除范围均以D₂式为标准。肿瘤组织均经10%福尔马林固定，石蜡包埋，5μm厚连续切片，备作HE染色和凋亡细胞DNA 3'-羟基末端标记。

　　二. 淋巴结资料的收集

　　收集胃癌标本可触及的全部淋巴结，每例至少15枚以上，均送病理切片检查。若有1个淋巴结有癌细胞转移，则视该患者淋巴结转移阳性；若全部淋巴结切片检查均阴性才视该患者淋巴结转移阴性。

　　三. 细胞凋亡的检测

　　采用DNA3'-羟基末端标记法^［2］。细胞凋亡检测试剂盒为Santa cruiz公司产品。样本片常规脱蜡，加 20 μg/mL蛋白酶K，50 μL/片，室温放置15分钟，然后双蒸水洗3次，3分钟/次。浸入新鲜配制0.3%过氧化氢水溶液中，室温20分钟，双蒸水洗2次，3分钟/次。加标记缓冲液，10μL/片，室温放置1分钟后甩掉。在冰上取末端脱氧核糖核酸转移酶（TdT）和Biotin-dUTP各 l μL,加入8 μL标记缓冲液中，混匀后加到样本片上，10 μL/片，室温10分钟，甩掉封闭液。用封闭液按1∶50的比例稀释亲和素-辣根过氧化物酶(Auidin-HRP)为工作液,50μL/片加样本品上，37℃湿盒中反应30分钟。在0.01 MPBS中洗4次，3分钟/次，加新鲜配制0.3%过氧化氢-0.5 g/mL DAB显色液,显色10分钟左右，常规封片。

　　四. 结果判定和计算

　　细胞核中有棕色颗粒者为阳性细胞即肿瘤凋亡细胞。每张切片计算20个高倍视野共1000个分布清晰的肿瘤细胞，计算其中阳性细胞的百分率，作为该病例的阳性细胞率。

　　五. 统计学处理

　　采用t检验。

　　结　果

　　癌巢中可看到一些散在的棕色凋亡细胞，每张切片均出现阳性染色。LN⁺组的肿瘤细胞凋亡率在2.8%～5.0％之间，平均为(3.8±0.7)%，LN^-组的肿瘤细胞凋亡率在1.2%～3.1%之间，平均为(1.9±0.7)%,前者比后者明显增高(P＜0.01),差异非常显著。

　　讨　论

　　细胞凋亡是细胞遵循自身一定程序的死亡，它与细胞坏死相比具有不同的形态学、酶学、生物化学及分子生物学特点。许多研究表明细胞凋亡具有特殊的生物学意义,它不仅与胃癌的浸润深度正相关，而且与胃癌的生长方式相关^［1，3］。本研究结果中早期胃癌淋巴结转移阳性组的肿瘤细胞凋亡率比阴性组明显提高（P＜0.01），表明胃癌组织的肿瘤细胞凋亡率与胃癌的淋巴结转移情况有明显关系，Tabete^［4］等亦认为细胞凋亡与胃肠道肿瘤的转移有非常密切的关系。本研究以早期胃癌作为研究对象，切除方式以D₂为标准，从而最大限度地减少了外界诱导因素对细胞凋亡率的影响以及手术对淋巴结资料的影响。对于测定的结果，可信程度增高。

　　但是Fujita^［5］的研究结果却相反，他认为细胞凋亡与肿瘤的生长转移呈负相关关系，并且细胞凋亡与肿瘤关系的本质目前仍不清楚，还有许多关键的问题仍未解决。

　　我们认为，无论是正相关还是负相关，细胞凋亡与肿瘤肯定有一定的内在关系。从我们的结果和其他文献的报告，可以初步推测，细胞凋亡与早期胃癌淋巴结转移存在正相关的可能性较大，对于我们预测早期胃癌的淋巴结转移及预后有一定的指导意义,但能否作为一种判断预后的指标，仍须作进一步的研究。

　　参考文献

　　1　Saegusa M, Takano Y, Wakabayashi, et al. Apoptosis and its association with cell proliferation and differention. Jpn J Cancer Res 1995;86:743-748.

　　2　Gavrieli Y, Sherman Y, Ben S, et al. Identification of programmed cell death in situ via specific labelling of nuclear DNA fragmentation. J Cell Biol1992;119:493-501.

　　3　Okuyama S,Yokota K, Yuki M, et al. Cell proliferation and cell death(apoptosis) in epithelial tumours of the stomach analysis of tumor tissues by the endoscopic mucosal resection. Nippon Shokakibyo Gakkai Zasshi1995;92:130-139.

　　4　Tabete S, Ishida M, Kasagi N, et al. Apoptosis occurs more frequently in metastatic foci than in primary lesion of human colorectal carcinoma. Int J cancer 1996;65:173-177.

　　5　Fujita N, Kataoka S, Tsuruo T, et al. Lymphatic metastasis and cell adhesion, growth and growth inhibition. Gan To Kagaya Ryoho 1993;20:399-404.

(收稿：1999-04-03　修回：1999-10-11)