血管生成抑制剂TNP-470对肝癌组织VEGF表达的影响

中华肿瘤杂志 2000年第1期第22卷 基础研究

作者：夏景林　任正刚　杨秉辉　叶胜龙　林芷英

单位：夏景林（上海医科大学中山医院肝癌研究所，200032）；任正刚（上海医科大学中山医院肝癌研究所，200032）；杨秉辉（上海医科大学中山医院肝癌研究所，200032）；叶胜龙（上海医科大学中山医院肝癌研究所，200032）；林芷英（上海医科大学中山医院肝癌研究所，200032）

　　TNP-470对肿瘤生长和转移的抑制作用已较为肯定，我们的实验也证实TNP-470能抑制裸鼠人肝癌的生长和转移^［1］。研究表明，TNP-470的抗血管生成作用是通过抑制血管内皮细胞的增殖来实现的^［2］。

　　VEGF是由肿瘤细胞分泌的一种生长因子，能促进血管内皮细胞增殖，从而在肿瘤血管生成中起重要作用。迄今，未见TNP-470对体内癌组织VEGF表达影响的报道。我们利用高转移人肝癌裸鼠模型(LCI-D20)，通过逆转录PCR(RT-PCR)，检测了TNP-470对肝癌组织VEGF表达的影响，旨在进一步揭示TNP-470的抗血管生成作用机理。

　　一、材料与方法

　　1.材料：高转移人肝癌裸鼠模型(LCI-D20)。引物：在VEGF mRNA的上游转录起始端和下游非编码区分别设计的5′端和3′端引物。引物序列为：正向(正义)：5′-CAAGGATCCATGAACTTTCTGCTGTCT TGGG-3′；反向(反义)：5′-AAACTTAAGAGGGAGGTCCCTTCCTCC-3′。β actin引物序列为：正向引物5′-TTGTAACCAACTGGG-ACGATA-3′；反向引物：5′-GATCTTGATCTTCATGGTGCT-3′。

　　2.方法：肿瘤皮下种植后第2天起，隔天给药1次，共8次。治疗组给TNP-470(30 mg/kg)，对照组给相应溶剂(3%酒精)。接种后第26天，取TNP-470治疗组和对照组的肝癌组织各6例。用异硫氢酸胍一步法行组织总RNA的提取，经逆转录PCR反应。最后行凝胶电泳分析。统计学处理：两组间结果的比较采用t检验。

　　二、结果

　　VEGF在1%的琼酯糖中可见两条特异条带，分子量分别在377～515，515～695 bp之间，与VEGF的_165，189符合。β-actin为一条特异条带，分子量760 bp。治疗组和对照组肝癌组织均可见VEGF的表达，表达形式相同，但治疗组肿瘤组织中VEGF的表达稍低于对照组。以β-actin作为内标，对照组和治疗组VEGF₁₆₅扫描相对量分别为0.32±0.02，0.29±0.02；两组VEGF₁₈₉扫描相对量分别为0.22±0.01，0.19±0.01(P均＞0.05)。

　　三、讨论

　　肿瘤的血管生成包括以下三个环节：(1)肿瘤细胞产生一些可溶性的血管生成因子，如：VEGF、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)等。(2)血管生成因子刺激血管内皮细胞增生和迁移。(3)金属蛋白酶的激活，成熟的血管内皮细胞得以降解细胞外间质和向血管生成因子移动。其中任何一个环节受到干扰都可抑制血管生成，TNP-470抑制血管内皮细胞的作用已较为明确^［2］。

　　许多肿瘤细胞都能分泌VEGF，我们发现肝癌组织有较高的VEGF的表达^［3］。所以，我们测定了TNP-470治疗组和对照组VEGF的表达，结果表明，TNP-470对肝癌组织VEGF的表达无明显抑制作用。这一结果类似于文献报道的结果，即TNP-470对体外培养的仓鼠胰腺癌细胞的VEGF表达无影响^［4］。

　　TNP-470对肝癌组织VEGF的表达无明显的抑制作用，提示TNP-470的抗血管生成作用不是通过抑制血管生成因子的表达来实现的。目前的研究表明，TNP-470能强烈地抑制血管内皮细胞的增殖而起抗血管生成作用^［2］。

　　当然，肿瘤血管生成与细胞因子之间的关系及其调控机制十分复杂，我们仅从VEGF表达这一角度作了一个初步的探讨，尚有许多问题有待研究。如肝癌组织中是否有其他血管生成因子?TNP-470对这些生长因子是否有抑制作用?TNP-470对血管生成的其他环节是否有干扰作用?

　　参考文献：

　　［1］　Xia JL, Yang BH, Tang ZY, et al. Inhibitory effect of TNP-470 on tumor growth and metastasis in nude mice bearing human hepatocellular carcinoma. J Cancer Res Clin Oncol, 1997,123：383-387.

　　［2］　Egawa S, Tsutsumi M, Konishi Y, et al. The role of angiogenesis in tumor growth of Syrian hamster pancreatic cancer cell line HPD-NR. Gastroenterology, 1995,108：1526-1533.

　　［3］　夏景林，杨秉辉，叶胜龙，等.原发性肝癌肿瘤血管密度及VEGF表达的临床病理意义.中华肿瘤杂志，1998，20：440-442.

　　［4］　Ingber D, Fujita T, Kishmoto S, et al. Synthetic analogues of fumgillin that inhibit angiogenesis and suppress tumor growth. Nature, 1990,348：555-557.

收稿日期：1999-03-30