肝动脉化疗栓塞＋门静脉灌输CD3AK细胞治疗转移性肝癌的研究
中国肿瘤临床1999年第26卷第11期
侯冰宗 李绵 刘泓基 钟能锭 解立桦 何天昌
关键词：肝动脉化疗栓塞 门静脉插管化疗 大肠癌肝转移
肝动脉、门静脉同时栓塞化疗治疗肝癌取得了显著的疗效，本研究采用肝动脉化疗栓塞＋门静脉插管化疗，术后从门静脉灌输CD3AK细胞(CD3monoclonal antibody Activated Killer cell，CD3AK细胞)治疗15例大肠癌肝转移的患者，探索该疗法的临床疗效及其对机体免疫功能的影响。
1 材料与方法
25例不能行Ⅰ期切除的大肠癌肝转移患者(原发灶已切除，病理证实)，年龄49±10.4岁，一般情况好，无黄疸，腹水及其他器官转移灶；随机分为A组(治疗)15例，B组(对照)10例。CD3AK细胞的制作：正常献血员外周血经密度梯度离心所得富含淋巴细胞成分液，置于RPMI1640细胞培养液(含CD3单克隆抗体30ng/ml)，5％CO2，37℃孵育8～12天，收集CD3AK细胞制成细胞悬液200ml/瓶即用(内含CD3AK细胞2×108/200ml)；手术：常规剖腹行肝动脉插管注入表阿霉素30mg、丝裂霉素10mg、碘化油10～15ml后行肝动脉结扎，门静脉插管注入表阿霉素30～50mg、丝裂霉素8～10mg后保留，用于术后灌输CD3AK细胞悬液；A组术后第1天开始，从门静脉输入CD3AK/IL－2(细胞数2×108/次，IL－2:10万单位)，1次/日，连续10天，休息5天为1周期，2周期为1疗程，CD3AK治疗期间不作其它治疗(如放疗、介入治疗等)，B组插管留至日后化疗；采用MTT法检测CD3AK细胞抗瘤活性：靶细胞为Hela－3、K562细胞株；术前1周及术后第1、2、3、4周末分别测定患者外周血T淋巴细胞亚群(APAAP法)，T淋巴细胞转化率，NK细胞活性试验(LDH释放改良法)，IL－2R(间接免疫荧光法)；根据WHO“实体瘤近期疗效的分级标准”判断临床疗效；数据用x±s表示，采用t检验或F检验。
2 结果
对Hela－3细胞的杀伤活性，CD3AK(54.12±12.34)与LAK(31.76±9.63)相比较有显著性差异(P＜0.05)，对K562细胞的杀伤活性，CD3AK(77.45±7.38)与LAK(48.28±6.85)相比较有显著性差异(P＜0.05)；临床疗效：A组15例，CR2例，PR10例(其中5例肿瘤缩小后行Ⅱ期手术切除)；SD3例，(CR＋PR12/15)。B组10例，CR0例，PR6例(其中2例肿瘤缩小后行Ⅱ期手术切除)，SD4例(CR＋PR6/10)；生存时间：A组15例中1例9个月，2例1年8个月，12例1年以上(其中4例16个月以上、4例2年以上)。B组10例中2例11个月，1例14个月，2例16个月，5例1年以上(其中1例16个月以上、2例2年以上)；机体免疫功能改变如附表所示。
附表 A、B、C组治疗前后患者免疫功能的变化(x±s)
| 分组 |
CD3 |
CD4 |
CD8 |
CD4/CD8 |
NKC |
IL－2R |
T 淋巴细胞转化率 |
| A组 (15例) |
|
| 术前1周 |
27.63±4.14＃＃ |
35.41± 7.96＃ |
30.41± 4.92＃ |
1.23± 0.41＃ |
27.63± 4 .34＃ |
28.93± 4.02＃＃ |
38.41± 9.14＃ |
| 术后1周 |
33.13± 4.83** |
40.67± 3.33** |
24.01± 4.54** |
1.85± 0.31* |
31.32± 4. 49** |
37.07± 3.57** |
45.26± 7.32** |
| 术后2周 |
35.27± 6.42** |
46.27± 5.47** |
21.24± 5.36** |
2.18± 0.45** |
35.27± 6.42* |
39.63± 4.45** |
48.33± 8.06** |
| 术后3周 |
38.33± 3.20** |
47.67± 4.47** |
20.45± 6.22* |
2.42± 0.67* |
38.33± 3.2 0** |
44.67± 7.96** |
55.78± 8.87** |
| 术后4周 |
41.07± 2.84* |
49.27± 8.56* |
19.50± 4.65** |
2.51± 0.85* |
41.07± 2.84* |
45.93± 7.89** |
56.02± 10.21* |
| B组(10例) |
|
| 术前1周 |
28.49± 3.81＃ |
37.47± 9.98＃ |
29.68± 4.66＃ |
1.24± 0.41＃ |
28.49± 3.81＃ |
30.13± 3.48＃＃ |
39.45± 9.13＃ |
| 术后1周 |
22.87± 5.42 |
32.73± 6.79 |
36.01± 5.48 |
0.97± 0.26 |
22.87± 5.42 |
21.07± 4.66 |
31.57± 10.56 |
| 术后2周 |
24.27± 6.54 |
33.67± 7.63 |
32.14± 6.32 |
1.14± 0.22 |
24.47± 6.85 |
24.53± 4.19 |
34.85± 7.31 |
| 术后3周 |
27.13± 6.04 |
34.47± 8.57 |
29.67± 5.21 |
1.36± 0.34 |
27.13± 6.24 |
28.27± 5.22 |
38.85± 6.43 |
| 术后4周 |
35.08± 7.98 |
41.67± 6.86 |
27.06± 4.84 |
1.87± 0.27 |
35.07± 7.98 |
35.07± 6.58 |
45.69± 9.76 |
*P＜0.05；**P＜0.001(A组与B组同期同类指标相比较)；＃P＜0.05；＃＃：P＜0.001(A组或B组术前与术后1周同类指标相比较)3 小结
本研究在双重化疗、栓塞的同时采用门静脉输注CD3AK细胞治疗转移性肝癌，取得良好的临床疗效，增加Ⅱ期手术切除率(A组7/15，B组2/10)。克服了由手术打击所引起的机体免疫力明显减退的缺陷，从而更好地发挥术后早期机体的抗肿瘤作用。NK细胞、T淋巴细胞转化率以及CD4/CD8明显增加，特别是IL－2R由术前28.93±4.12上升至术后第4周的45.93±7.89(P＜0.001)，更显示T淋巴细胞处于明显的激活增殖状态，这可能与CD3AK细胞直接杀灭或抑制肿瘤细胞，分泌细胞因子，促进免疫调节、免疫监视及免疫细胞直接或间接发挥抗肿瘤作用有关。
* 本文课题受广东省医学科研基金资助 （编号 B1997137）
作者单位：侯冰宗 李绵 钟能锭 解立桦 何天昌 暨南大学医学院第三附属医院肿瘤外科 广东省珠海市519000
刘泓基 桂林医学院附属医院
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