重组幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位在大肠杆菌中的表达及免疫学分析

　　中华微生物学和免疫学杂志2000年第20卷第3期

郭学青　邹全明

　　关键词：幽门螺杆菌 热休克蛋白A亚单位大肠杆菌 表达 免疫学　　世界卫生组织已把幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)列为与胃癌发生有关的病原体，热休克蛋白(heat shock protein, Hsp)是其致病因子之一。我们将Hp HspA亚单位基因克隆，并对其在大肠杆菌中的表达及免疫原性进行了研究。

　　本实验根据引物设计的原则，经计算机分析设计了一对引物并在引物的5′端分别引入HindⅢ和EcoRⅤ酶切位点。采用PCR技术，从Hp基因组中扩增出HspA基因片段，将其定向克隆至PinPoint^TMXa-3载体，再转化到大肠杆菌JM109。筛选后获得的重组体经双酶切可获得342bp的HspA基因片段和3.33kb空载体片段。全自动测序仪测序分析与GenBank公布的序列相比，有1.75%(6/342)的编码碱基发生变异，1.78%(2/114)氨基酸序列不同，同源性高达98%以上。重组菌经IPTG(终浓度为500μmol/L)诱导10?h达高峰。SDS-PAGE和免疫印迹分析发现，HspA基因表达的蛋白质相对分子质量为13?000，与文献报道一致。重组蛋白占细菌总蛋白的38.5%。重组菌1升培养物离心，沉淀超声处理后，经Soft-Release亲和素树脂亲和纯化，蛋白回收量为1.2mg，SDS-PAGE电泳显示唯一蛋白带。将纯化重组蛋白免疫BALB/c小鼠可刺激机体产生抗该重组蛋白的抗体。用重组蛋白HspA作抗原包被平板，经酶联免疫吸附试验检测发现，8例Hp抗体阳性患者血清中有5例与重组蛋白HspA反应阳性，而4例正常人血清与之无交叉反应性。5例与重组蛋白HspA反应阳性的患者皆为胃溃疡或十二指肠溃疡明确病史10年以上，证实了Perez等的HspA血清抗体阳性是Hp长期感染的结论。本实验为揭示HspA的结构、功能，为基因工程疫苗的研究奠定了重要的实验基础。

　　作者单位：郭学青(解放军266医院检验科)