哮喘患儿T细胞亚群及细胞因子的变化
中华儿科杂志 2000年第2期第38卷 论著摘要
作者：鲁继荣 姚丽萍 宋丽君 孙景辉 成焕吉 傅文永 于凌云 邹映雪
单位：鲁继荣 孙景辉 成焕吉 傅文永 邹映雪（130021 长春，白求恩医科大学附属第一医院儿科）；姚丽萍（包头医学院附属第一医院儿科）；宋丽君（吉林省儿科研究所）；于凌云（中国第一汽车集团公司职工医院）
哮喘发病机理方面的研究已成为当今哮喘的研究热点。目前认为T细胞的激活及其释放的细胞因子在哮喘的发病中起着重要作用。关于哮喘患者的T细胞亚群改变，各家报道结果不一。现将我们观察的结果报告如下。
对象
1998年1月～1999年1月间在我院诊断为支气管哮喘的患儿38例，均符合全国儿科哮喘协作组制定的哮喘诊断标准［1］。发作期38例，其中男29例，女9例；平均年龄(8±4)岁（2～14岁）。其中有27例缓解期时第2次采血，距第1次采血时间间隔为（20±3） d。对照组20例，均为我院同期门诊体检正常儿童，其中男14例，女6例，平均年龄（8±4）岁（3～14岁）。
方法
1．采静脉血3 ml，1 ml放置后3 000 r/min离心，用于IgE检测；2 ml加EDTA抗凝剂，一部分提取血浆，用于白细胞介素(IL)-4、IL-5、γ干扰素(INF-γ)检测；一部分用淋巴细胞分离液提取单个核细胞，检测T细胞亚群。
2．人IL-4、IL-5、IFN-γ ELISA试剂盒购自深圳晶美生物工程有限公司；抗人IgE单抗试剂盒、T淋巴细胞亚群检测试剂盒（APAAP法）购自北京邦定生物医学公司。
表1 发作期、缓解期及正常对照组T细胞亚群、IL-4、IL-5、IFN-γ、IgE结果
| 组别 |
例数 |
CD+3(%) |
CD+4(%) |
CD+8(%) |
CD+4/CD+8 |
IL-4
(ng/L) |
IL-5
(ng/L) |
INF-γ
(ng/L) |
IgE
(×103IU/L) |
| （1） |
38 |
66±7 |
41±7 |
23.3±3.0 |
1.75±0.75 |
45±9 |
15±6 |
277±138 |
365±197 |
| （2） |
27 |
70±8 |
42±7 |
24.0±4.0 |
1.76±0.15 |
44±9 |
14±5 |
285±145 |
220±136 |
| （3） |
20 |
71±6 |
41±5 |
24.2±2.5 |
1.71±0.14 |
38±9 |
11±4 |
670±147 |
176±136 |
| F值 |
|
4.42* |
0.23 |
0.58 |
0.76 |
5.10** |
4.57* |
57.14** |
10.5* |
| q值 |
| （1）与（2） |
|
3.35* |
|
|
|
0.65 |
1.4 |
0.32 |
4.91** |
| （1）与（3） |
|
3.63* |
|
|
|
4.38** |
4.27** |
14.11** |
5.80** |
| （2）与（3） |
|
0.54 |
|
|
|
3.55* |
2.81 |
12.94** |
1.24 |
注：（1）为哮喘发作组，（2）为哮喘缓解组，（3）为对照组；* P＜0.05 ** P＜0.01 3．实验结果用
±s表示，采用SAS软件方差分析和直线相关性分析的统计学处理方法。
结果
从表1中可以看出 ：（1）T细胞亚群： CD3发作组与正常组、缓解组相比，均明显下降，差异有显著意义（P＜0.05）；CD4、CD8、CD4/CD8比值在三组间差异无显著意义。（2）发作组与正常组相比，IL-4、IL-5、IgE明显升高，IFN-γ明显降低，差异均有显著意义（P＜0.01）；发作组与缓解组相比，IgE明显升高，差异有显著意义（P＜0.01）；缓解组与正常组相比，IL-4明显升高，IFN-γ明显降低，差异均有显著意义（P＜0.05，P＜0.01）。（3）相关分析：发作期IL-4与IL-5、IL-4与IgE、IL-5与IgE均呈正相关（r=0.340、0.927、0.335，P＜0.05、0.01、0.05），而IL-4与IFN-γ、IFN-γ与IgE呈负相关（r=-0.400、-0.407，P＜0.05）。
讨论
T细胞按细胞表面分化群抗原主要分为CD+4和CD+8亚群，按免疫功能不同分为Th、TS和TC亚群。CD3抗原是成熟T细胞的重要表面标志，CD4分子一般表达在Th细胞表面，CD8分子多表达在TS和TC细胞上。T细胞在哮喘的发病机制中主要起着免疫调节作用，这种调节作用是通过其分泌的多种细胞因子间复杂的相互作用而实现的。本实验结果表明，哮喘发作时CD+3细胞明显降低，即成熟T细胞数目减少，表明其免疫调节功能紊乱。Th细胞具有辅助体液免疫和细胞免疫的功能，TS细胞在免疫应答中主要起抑制性调节作用。从本实验结果看，哮喘患儿CD+4、CD+8、CD+4/CD+8与正常组相比，差异均无显著意义，即Th和TS细胞处于平衡状态，但细胞因子检测结果表明，哮喘患儿IL-4、IL-5明显升高，IFN-γ明显降低，说明哮喘发作时细胞因子网络已经发生了很大的变化，而不同的细胞因子是由不同的Th细胞分泌的，提示Th1、Th2细胞存在严重的失衡现象，而总的Th细胞即CD+4细胞在数量上并无明显的变化，揭示了在哮喘的发病机制中，Th细胞功能性亚群失衡起着重要作用。不同类型的哮喘及哮喘发作的不同时相检测外周血CD+4、CD+8及CD+4/CD+8可能得到不同的结果。在哮喘发作中T细胞亚群结果不一致，可能是由于各种相关因素综合影响所致。
人类Th细胞分为Th1和Th2亚群［2］。Th1细胞主要分泌IFN-γ，Th2细胞主要分泌IL-4、IL-5。本实验结果显示，哮喘患儿IL-4明显升高，IL-4和IgE呈正相关，证实了IL-4有促进IgE产生的作用，IL-4是通过诱导B淋巴细胞发生免疫球蛋白重链的类别转换而产生IgE的。本实验表明，IL-4和IgE呈正相关，IFN-γ与IgE、IL-4与IFN-γ呈负相关，说明在哮喘患儿IgE合成中IL-4和IFN-γ所起的作用是相互拮抗的，IL-4可促进IgE的合成，IFN-γ可抑制IgE的合成，且IFN-γ可以拮抗IL-4诱导IgE产生的活性。IL-5和IL-4呈正相关，IL-5和IgE呈正相关，表明IL-5可协同IL-4增强IgE的合成和分泌，这与Koning的报道［3］一致。且IL-5在嗜酸性粒细胞的分化、聚集、激活及存活方面起着重要作用。
本组患儿经治疗后处于缓解期者，尽管IL-4、IL-5有下降趋势，IFN-γ有上升趋势，但仍未完全恢复正常，说明支气管哮喘是一种气道的慢性炎症性疾病，揭示了缓解期哮喘患儿继续抗变态反应性炎症治疗的必要性。糖皮质激素通过抑制IL-3、IL-5和GM-CSF可进一步抑制嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞的功能和活性，且可通过抑制IL-4来阻断IgE的合成。总之，研究哮喘患儿的发病机理，可为有效地治疗哮喘提供理论根据，为研制新型抗哮喘药物开辟新的途径。
参考文献
［1］全国儿科哮喘协作组.儿童哮喘诊断标准和治疗常规. 中华儿科杂志, 1993,31:222-224.
［2］Vecchiarelli A, Siracusa A, Monari C, et al. Cytokine regulation of lowaffinity IgE receptor (CD23) on monocytes from asthmatic subjects. Clin Exp immunol, 1994, 97:248-253.
［3］Koning H, Neijens HJ, Baert MR, et al. T cell subsets and cytokines in allergic and non-allergic children. Ⅱ. analysis of IL-5 and IL-10 mRNA expression and protein production. Cytokine, 1997,9:427-436.
收稿日期：1999-05-07
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