幽门螺杆菌感染的诊断进展

　　幽门螺杆菌（Helicobacter pyloir，Hp）是慢性B型胃炎的主要原因，与非溃疡性消化不良，胃和十二指肠溃疡及胃癌关系密切。流行病学研究表明，在国人无症状或健康人群Hp总感染率在33.9％～49.6％；在慢性胃炎Hp检出率为50％～80％，胃溃疡为70％～80％，十二指肠溃疡为80％～100％。但Hp感染缺乏临床表现的特征，因而目前仍主要靠实验室诊断。以前国内外诊断Hp的方法无外三大类，一是直接从胃粘膜中检测Hp，包括细菌培养、组织涂片和切片染色；二是尿素酶试验或呼吸试验诊断Hp；三是免疫学方法，如酶联免疫吸附试验（ELISA）等。近年来通过多项研究和方法改进，可克服某些不足之处，下面将国内Hp感染的诊断方法研究近况作一简述。

　　1　通过胃镜

　　1.1　病灶冲洗法下接涂片

　　组织涂片革兰染色法检测Hp感染简便、快速、敏感性可达80％以上，但也有低于50％的检出率，除与检验医师经验有关，还与取材部位和Hp数量有关。新近何松等对52例慢性胃炎患者在切取胃窦部病变区组织活检的同时，内镜下用生理盐水对病灶冲洗，将总洗液离心后制成涂片比较。结果发现涂片Hp阳性率明显高于切片方法（53.9％比38.5％），认为冲洗法覆盖面大，可广泛、反复冲洗，取材较活检更全面，可提高Hp检出率。

　　1.2　胃镜下直接显色法

　　Hp菌体内含丰富尿素酶能分解尿素，改变pH值。根据这一原理，李增灿等用粉红色素喷洒胃粘膜方法对100例慢性胃炎研究结果显示，粉红色素喷洒法着色率68％；传统切片法HP阳性率为60％；胃溃疡25例着色法阳性率80％，切片法72％；十二指肠溃疡50例，着色法阳性率90％，切片法为80％，表明切片法存在假阴性，而胃镜下直接显色法可提高Hp的检出率。

　　1.3　尿素酶活性测定Hp

　　目前诊断Hp常采用的细菌培养，组织染色及尿素酶试验等方法均需内镜取材，且方繁琐，费时，并且结果受Hp斑片状分布的影响。崔东来等根据Hp产生大量尿素酶的原理，采用尿素酶活性诊断Hp，Hp感染者尿素酶活性明显高于无Hp感染者，以尿素酶活性0.31作为截断值，其诊断Hp的敏感性、特异性和准确性分别为95％、84％和93％，而且认为尿素酶活性诊断Hp快速、简便，不受血尿素氮影响等优点，也比测定胃液尿素氮方法优越。

　　2　血清学

　　2.1　ELISA法

　　通过血清中Hp抗体测定Hp感染的方法比较多，有ELISA法、补体结合试验、单克隆抗体测定法、免疫印迹试验、被动血凝试验和细菌凝集试验等，尤其是ELISA法应用最广。Hp感染后很快会激发机体产生特异性体免疫，血清中出现IgG，IgA，IgM抗体，国内外多采用ELISA法检测HpIgG抗体。

　　2.1.1　HpIgG测定

　　在广州地区一项流行病学调查Hp感染率研究中，经1848例人群Hp感染分析，并经组织病理学和细菌培养比较，认为测定HpIgG抗体诊断Hp感染其敏感性和特异性分别达100％和91％。刘勤俭等对235例人群及20多个家庭Hp感染调查时，用间接ELISA法检测血清HpIgG抗体，其敏感性和特异性分别达94％和85％。新近童明庆等介绍了一种斑点—ELISA技术，经对18例慢性胃炎、消化性溃疡患者，19例儿童和22例正常成人行HpIgG抗体测定，患者组抗体检出率72.2％，与快速尿素酶法相比，符合率为83.3％，诊断的敏感性和特异性分别为91.7％和66.7％。认为本法克服了快速尿素酶法需胃镜取材的缺点，因而较适合临床Hp感染的初筛检查和流行病学研究。

　　2.1.2　HpIgA测定

　　最近王正祥等经用间接ELISA法检查血清HpIgG抗体和IgA抗体比较，结果在胃炎抗HpIgG阳性率达82.3％(93/113);Hp现感染率74.3％(84/113);在抗HpIgG阳性标本中有11.8％(11/93)经Hp培养和(或)涂片阳性，而在抗HpIgA阳性标本中仅2.6％(2/78)经Hp培养和(或)涂片阴性，因而认为抗HpIgA升高比抗HpIgG升高更能反映机体正被Hp感染.可作为Hp现感染的诊断指标，而抗HpIgG可作为胃炎患者初筛及Hp感染的流行病学研究的指标。

　　2.1.3　尿素酶检测

　　在行ELISA试验时最重要的是抗原的选择，以前使用的一些抗原制备是应用全菌或全菌超声粉碎物作抗原，这种抗原制备含有多种菌体及鞭毛蛋白，其中有些物质或不具备抗原性、或为其它菌种所共有，如Hp与空肠弯曲菌有血清交叉反应等因素。因而试验的敏感性高，但缺乏特异性，酸提取法虽较纯净，但特异性和敏感性不理想。有研究人员，采用柱层析法纯化了Hp的尿素酶，并用该尿素酶作ELISA测定包被抗原，对120例有消化不良症状的血清进行检测，平均光密度值在Hp阳性组明显高于Hp阴性组，如以0.3光密度值为标准，诊断的敏感性和特异性分别为95％和91％。因而认为用尿素酶作为抗原应用于ELISA试验具有良好的特异性和敏感性。

　　2.1.4　单克隆抗体测定法

　　有研究人员介绍了HpmAbs（单克隆抗体）免疫过氧化物酶染以法诊断Hp感染，用ELISA法将HpmAbs与已知细菌反应，结果HpA值明显高于其它细菌，因而认为HpmAbs为Hp分离纯化后的鉴定提供了手段。

　　2.2　聚合酶链反应法

　　诊断Hp感染的方法很多，但他们有一共同特点是不能达到足够的敏感性，尤其是不能准确判断治疗后Hp是否被彻底清除。王蔚虹等采用聚合酶链反应（Polymerase chain reaction，PCR）探讨其在Hp诊断和评价治疗后根治效果中的意义，结果PCR方法检测胃粘膜活检标本中的Hp，简便、快速、具有高度敏感性，可检出最小HpDNA量为0.1pg，特异性达100％，对其它细菌及无Hp感染人胃粘膜呈阴性反应。PCR用于Hp感染诊断与尿素酶试验、细菌培及银染色法比较，更敏感，而且PCR可检出常规方法不能检出的Hp。杨海涛等将巢式PCR在牙斑中检出Hp，其特异性达100％，敏感性达到可检测0.1fg细菌DNA的水平。

　　由于不同实验方法可得出不同结论，因而需要正确加以评价。如牙斑中存在Hp是否为主要传染源意见尚不一致。1991年Desai等用尿素酶试验对43例消化不良患者的牙斑中、胃窦及胃粘膜标本标进行检测阳性率分别为98％，67％和70％，认为牙斑中Hp是主要传染源。宋群生等用尿素酶试验、细菌培养和免疫荧光抗体染色和电镜观察，也发现消化性溃疡、慢性胃炎及胃癌等患者牙斑中可有大量Hp存在，其形态学、生化特性和免疫特性均与胃粘膜Hp相似。从牙斑的直接快速尿互酶试验和抗Hp免疫荧光抗体染色结果看，胃粘膜上有Hp，牙斑中也有Hp ；胃粘膜上未发现Hp者，牙斑中也有Hp寄生，且牙斑中的Hp数量、密度均高于胃粘膜。但相反意见认为，Hp有尿素酶，可分解尿素，使pH升高，当pH高于6.8时，酚红由黄色变红色，而单纯口腔内的pH值足以使尿素酶试验呈阳性结果并不能肯定是Hp感染。根据对21例患者用N-PCR法测定胃粘膜Hp 阳性者，8例牙斑中也检出Hp，而胃粘膜阴性者，牙斑Hp均阴性，提示牙斑中仅有少量Hp存在。

　　3　核素标记呼气试验

　　Hp具有较强的内源性尿素酶，能分解胃内及核素标记的尿素，产生CO₂和NH₃，CO₂被吸收后经肺呼出，因此只需分析呼气中的¹⁴C或¹³C即可诊断Hp的存在。国内也采用¹³C－尿素为示踪剂诊断Hp感染，认为具有较好诊断价值，但受技术条件和价格所限，不适合国内，尤其基层医院开展。

　　综上的述，Hp感染的诊断方法比较多，快速尿素酶试验、尿素酶活性试验、直接显色法、涂片革兰染色法、组织切片染色等简便、易行；血清学检查尤适用于流行病学调查，而PCR主法对判断治疗后Hp的根除情况更为准确，不同研究目的，采用不同方法似乎更妥善。

杨保忠　丁艳梅　陆瑞兰