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载脂蛋白E基因多态性与散发性老年性痴呆病的关系

载脂蛋白E基因多态性与散发性老年性痴呆病的关系

中国病理生理杂志 2000年第8期第16卷 论  著

作者:崔天盆 周新 徐红 郑芳

单位:崔天盆(湖北医科大学第二临床学院检验系, 武汉 430071);周新(湖北医科大学第二临床学院检验系, 武汉 430071);徐红(湖北省恩施州中心医院);郑芳(湖北医科大学第二临床学院检验系, 武汉 430071)

关键词:载脂蛋白E类;阿尔茨海默病;基因;增强子元件

  [摘 要]  目的: 探讨载脂蛋白E(apoE)外显子4和增强子元件基因多态性与散发性Alzheimer病(AD)的关系。方法: 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术分别检测apoE外显子4和内含子1内增强子元件(IE1)基因型。结果: (1)ApoE外显子4基因多态性:AD组ε3/4基因型频率(0.381)和ε4等位基因频率(0.226)显著高于对照组(P<0.05)。(2)ApoE IE1基因多态性AD组G/G基因型频率(0.595)显著高于对照组(P<0.05)。(3)有apoE ε4个体患AD风险为无ε4个体的3倍,比值比为2.932,95%可信区间1.379~6.226; G/G基因型个体患AD风险为G/C、C/C个体的2倍,比值比为2.223,95%可信区间1.075~4.599; 经统计分析发现apoE ε4与IE1 G/G呈非常显著性正相关(P<0.01);排除apoE ε4后发现IE1 G/G与AD发病风险无关。结论: ApoE ε4等位基因是个体发生AD的危险因素,IE1 G/G增加AD发病风险是因其与ε4相关所致。

  [中图分类号] R749.1   [文献标识码] A

  [文章编号] 1000-4718(2000)08-0741-03

Relationship between apolipoprotein E gene polymorphism

  and sporadic Alzheimer's disease

CUI Tian-pen,ZHOU Xin,XU Hong, ZHENG Fang

  (Department of Medical Laboratory Science, Second College of

  Clinical Medicine, Hubei Medical University, Wuhan 430071,China)

  [Abstract]  AIM: To evaluate the association between apolipoprotein E(apoE) gene polymorphism and sporadic Alzheimer's disease (AD). METHOD: A case-control study was undertaken detecting the polymorphism of apoE by polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP). RESULTS:(1) The frequencies of ε3/4 genotype and ε4 allele in AD were significantly higher than that in age-matched controls(P<0.05). (2) The frequency of G/G genotype for apoE IE1 in AD was significantly higher than that in age-matched control (P<0.05). (3) The apoE ε4 allele was associated with a tripling of the risk for AD compared with no ε4 allele (odd ratio 2.932,95% CI 1.379~6.226);Homozygosity of the G allele in IE1 was associated with a doubling of the risk for AD compared with the G/C and C/C genotypes (odd ratio 2.223,95% CI 1.075~4.599). However, the IE1 G allele is also closely associated with apoE ε4. When the sample was split on the basis of apoE genotype,the association between IE1 G/G genotype and AD was no longer statistically significant. CONCLUSION: ApoE ε4 was a risk factor of AD, and the apparent association between IE1 G/G and AD is a consequence of the association between the ε4 and IE1 G/G genotype.

  [MeSH] Apolipoprotein E; Alzheimer's disease; Genes; Enhancer elements

  载脂蛋白E(apolipoprotein E, apoE)是一个多功能蛋白,体内许多组织均能合成和分泌apoE,以肝脏、脑组织为主。ApoE既是机体组织细胞低密度脂蛋白受体,极低密度脂蛋白受体的配基,又是肝细胞乳糜微粒受体的配基,参与脂质代谢;ApoE还参与活化水解脂肪的酶类,参与免疫调节和神经的再生。ApoE基因具有明显的变异,已发现至少30种以上的突变和两种基因多态性[1,2],其中以apoE外显子4基因的多态性与动脉粥样硬化的关系研究较多[3],此位点多态性还与Ⅲ型高脂蛋白血症有关。最近此位点多态性与老年性痴呆(Alzheimer, AD)病关系国外报道较多[3]。Mui等[1]还发现apoE内含子1内增强子元件(intron 1 enhancer element, IE1)的G/G基因型与AD高度相关。为了阐明中国群中散发性AD患者与apoE外显子4和IE1两位点基因多态性的关系,我们用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测42例AD患者apoE基因多态性,现报道如下。

  材 料 和 方 法

  一、 研究对象

  AD患者42例,其中男性22例,女性20例,平均年龄(74.43±14.08)岁,65岁至92岁,均为散发。根据美国精神疾病诊断统计手册第3版修订版[4],经两名以上临床医师的共同诊断认定。对照组:108例,男性53例,女性55例,平均年龄(74.44±12.83)岁,65岁至90岁为湖北地区无血缘关系的健康体检者,排除肝、肾、内分泌、心血管等疾病。以上受检者均空腹12 h后静脉抽血,血样品用EDTA抗凝,供提取模板DNA用。

  二、 实验方法

  模板DNA提取 用经典酚抽提法。ApoE外显子4的PCR-RFLP分析,参见文献[5]。ApoE IE1的PCR-RFLP分析,参见文献[1]

  结   果

  一、 AD与apoE外显子4基因多态性的关系

  AD组和对照组apoE基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡。AD组ε3/4基因型频率(0.381)显著高于对照组(0.16),ε3/3基因型频率显著低于对照组。AD组ε4等位基因频率(0.226)明显高于对照组(P<0.01),见表1。

表1  AD组和对照组载脂蛋白E外显子4基因型和等位基因频率分布

  Tab 1  The frequency distribution of apoE genotypes and alleles in AD and control groups

Group n Genotype frequency Allele frequency
ε2/2 ε2/3 ε2/4 ε3/3 ε3/4 ε4/4 ε2 ε3 ε4
AD 42   0   0.048   0.024   0.524   0.381*   0.024   0.036   0.738  0.226
Control 108 0.009 0.130 0.028 0.667 0.157 0.009 0.088 0.810 0.102

  * P<0.05, △ P<0.01,vs control

  二、 AD与ApoE IE1基因多态性的关系

  AD和对照组ApoE IE1基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡。以C/C基因型作参照,G/C基因型不增加AD发病风险(P>0.05),故将G/C与C/C基因型合并。以合并后G/C+C/C为参照,G/G基因型频率(0.595),显著高于对照组(0.398),见表2。

表2   AD组和对照组载脂蛋白E内含子1内增强子基因型

  和等位基因频率分布

  Tab 2  The frequency distribution of apoE IE1 genotypes and

  alleles in AD and control groups

Group n Genotype frequency Allele frequency
    G/G G/C C/C G C
AD 42 0.595* 0.357 0.048 0.774 0.226
Control 108 0.398 0.491 0.111 0.644 0.356

  *P<0.05, vs control  三、 排除apoE ε4作用后IE1基因多态性与AD的关系

  因apoE ε4和apoE IE1 G/G均位于apoE基因上,将病例与对照组合并,用方差分析对apoE ε4与apoE IE1 G/G进行关联分析,发现apoE ε4与IE1 G/G呈非常显著性正相关(P<0.01)。我们研究有ε4(ε4/4、ε3/4、ε2/4基因型)和无ε4(ε2/2、ε3/3、ε2/3基因型)将病例及对照分成两组,分别在组内进行卡方检验,均未发现IE1 G/G基因型在AD与对照组间的显著差异(P>0.005),见表3。

表3  AD组和对照组间根据有无apoE ε4分组

  IE1基因型频数分布

  Tab 3  The frequency distribution of apoE IE1 in AD and

  control group with and without apoE ε4

ApoE genotype Genotype frequency of IE1
  G/G G/C C/C G/C+C/C
Without ε4
AD 9* 13 2 15
Control 28 47 11 58
With ε4
AD 16* 2 0 2
Control 15 6 1 7

  * P>0.05, vs control  四、 AD危险因素apoE ε4、IE1 G/G分析

  为了反映apoE ε4和IE1 G/G二种危险因素的相对危险度,我们计算二者的比值比(OR),并用Miettinon氏卡方值法计算OR的95%可信区间(CI),发现这两种危险因素均属中等危险度,危险因素apoE ε4 的OR为2.932,高于IE1 G/G基因型的2.223。对OR进行显著性检验,apoE ε4有极显著差异,而IE1 G/G有显著差异,见表4。同其他作者一样,我们发现含apoE ε4等位基因的个体患散发性AD的风险是无ε4个体的3倍;而apoE ε4 IE1 G/G基因型个体患散发性AD的风险是G/C和C/C基因型个体的2.2倍 ,故apoE ε4等位基因是目前所知散发性AD最强的危险因素。

表4   AD危险因素apoE ε4、IE1 G/G 相对危险度分析

  Tab 4  Association between AD and ApoE ε4, IE1 G/G

  AD Control OR(95%CI)
ApoE
 with ε4 18 22 2.932*(1.378~6.226)
 without ε4 24 86
IE1
 G/G 25 43 2.223(1.075~4.599)
 G/G+C/C 17 65

  * P<0.01,△ P<0.05,vs control讨   论

  Alzheimer病是造成中老年智能障碍的重要疾患,是与记忆过早丧失有关的神经变性性疾病。本文分别对湖北地区散发性AD患者apoE外显子4和IE1进行基因分型,与国外[6,7]报道结果进行比较。与国外报道一致,湖北地区散发性AD apoE ε4等位基因频率和ε4/3基因型频率均显著高于年龄匹配对照组,因ε4/4基因型只有1例,未单独进行统计,也不便讨论ε4基因剂量效应。与国外Mui等[1] 报道相近,我们发现IE1 G/G基因型能增加散发性AD发病风险,比值比为2.223。表明apoE ε4和IE1 G/G基因型均是散发性AD的危险因子。

  对apoE ε4和IE1 G/G进行关联分析,发现两者呈显著正相关,表明apoE ε4与G等位基因是相关的。排除apoE ε4,我们发现无论在有或无ε4组IE1 G/G均不增加AD发病风险,表明IE1 G/G并非AD发病真正风险因素,只是因其与ε4相关有统计学意义。

  体外实验表明,apoE各种表型中,apoE ε4基因型相对应的apoE4对β淀粉样蛋白(β amyloid protein, βA)单体凝结成不溶性物质从而促进老年斑(senile plaques, SP)的形成[6]。体外实验还表明,apoE3同τ蛋白(Tau蛋白)可形成耐受SDS的复合物,而apoE4则不能,提示apoE3的结合可能调节Tau蛋白的磷酸化,从而稳定微管结构;相反apoE4则活化微管,形成神经纤维缠结(neurofibrillar tangles, NFT)。免疫组化分析表明SP及NFT中均显示apoE的存在。临床研究表明携带ε4等位基因的AD患者使用乙酰胆碱酯酶抑制剂如四氢氨基吖啶(tacrine)不如无ε4的AD患者有效[8]。故可认为apoE4在AD神经进行性病变中起重要作用。检测apoE基因型有助于辅助诊断和治疗方案的选择[9]

  Tel: (027)87317802  E-mail:Zhouxjyk@public. wh.hb.cn

  [参 考 文 献]

  [1] Mui S, Briggs M, Chung H,et al. A newly identified polymorphism in the apolipoprotein E enhancer gene region is associated with Alzheimer's disease and strongly with the ε4 allele[J]. Neurology, 1996,47:196~201.

  [2] 叶水清. ApoE基因的多态性[M].见:周新主编. 动脉粥样硬化与生物化学检验. 第1版. 武汉:湖北科技出版社, 1997. 54~55.

  [3] Roses AD. On the metabolism of apolipoprtein E and the Alzeimer's disease[J]. Exp Neurol, 1995, 132:149~156.

  [4] 孟家眉.老年期痴呆的诊断[M]. 见:孟家眉主编. 神经内科研究新进展. 第1版. 北京: 北京出版社,1994. 526~527.

  [5] 鄢盛恺, 周 新, 哈黛文 . 聚合酶链反应限制性长度多态性检测载脂蛋白E基因型[J]. 中华医学检验杂志, 1997,20(1):28~31.

  [6] Strimater WJ, Saunders AM, Schhhmechel D, et al. Apo-lipoprotein E: High-avidity binding to beta-amyloid and increased frequency of type 4 allele in late-onset familial AD[J]. Proc Natl Acad Sci USA, 1993, 90(5): 1977~1981.

  [7] Lendon Cl, Ashall F, Goate AM. Exploring the etiology of Alzheimer diseaes using molecular genitics[J]. JAMA, 1997,277:825~831.

  [8] Poirier J, Delisle M, Quirion R, et al. Apolipoprotein ε4 alleles as a predictor of cholinergic deficits and treatment outcome in Alzheiner's disease[J]. Proc Natl Acad Sci USA,1995,92:12260~12264.

  [9] Selkoe DJ. Alzheimer's disease: genotypes, phenotype, and treatments[J]. Science, 1997,275:630~631.

[收稿日期] 1999-04-07   [修回日期] 1999-11-29


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