使用RT－PCR及间期FISH法检测CML残留的白血病细胞

　　中国医学论坛报2000年4月27日26卷16期　总第710期

　　 刘艳荣摘译

　　关键词：慢性粒细胞白血病(CML)　残存白血病细胞　DNA水平检测　RNA水平检测　复发

　　据Blood(2000,95∶404)载　法国Chomel等报告，他们的研究提示对获得细胞遗传学完全缓解(CCR)的慢性粒细胞白血病(CML)患者仍需进行长期随访，在DNA水平检测残存白血病细胞，在RNA水平检测复发的危险性。

　　90％CML患者存在t(9,22)(q34,q11)易位，形成Ph¹染色体，分子水平则形成BCR－ABL融合基因。异基因骨髓移植(BMT)可治愈CML，α干扰素可使26％患者获得CCR。Chomel等采用特异的假阳性率很低的分裂间期荧光原位杂交(FISH)法检测BCR－ABL融合基因，定量(Q)RT－PCR法检测BCR－ABL嵌合mRNA分子，常规细胞遗传学法检测Ph¹染色体，及Southern印迹法在DNA水平检测BCR、ABL分子重排。研究纳入21例CML慢性期患者，男10例，女性11例，均存在t(9,22)(q34,q11)易位。11例患者接受α干扰素或联合化疗，经24(5～40)个月中位治疗期后，Ph¹染色体转为阴性，获得CCR。随访中位数为127(41～183)个月。另10例患者经过18(3～57)个月中位数α干扰素和(或)联合化疗治疗后，接受HLA相同的异基因BMT。所有患者均处于第一次慢性期，多数患者BMT前未达CCR。BMT后均转为正常核型。

　　结果显示，常规细胞遗传学法检测21例患者74～1047个分裂相未发现Ph¹染色体。间期FISH的平均假阳性信号在0.1％，每例患者至少计数200个间期核，发现所有患者均为BCR－ABL融合基因信号阳性，其阳性细胞数为1％～12％(平均6％～7％)。Q－RT－PCR可检测最少3个BCR－ABL嵌合mRNA分子，以ABL基因作为内参，平均每份标本可检测15万个ABL分子，其灵敏度以BCR－ABL/ABL比例表示为0.015％(3/150000)，小于0.01％示为阴性，所有10例BMT患者BCR－ABL/ABL比例均＜0.01％(FISH中位数为7％)，其中1例在获得CCR2年后，RT－PCR转为阳性，2个月后出现细胞遗传学复发，再次输注供者的淋巴细胞后，获得第二次CCR。干扰素治疗组中，6例BCR－ABL/ABL比例小于或接近0.01％(FISH中位数为2％)，5例大于0.01％(FISH中位数为7％)。

　　此结果说明，无论用BMT还是α干扰素治疗，即使获得CCR，CML患者体内仍残存非增殖白血病细胞，其机制尚不清，但复发患者RT－PCR可转为阳性，说明残存静止的白血病细胞可再次进入细胞周期，导致恶性克隆的扩增。