膀胱癌组织中Ki-67/MIB-1、PCNA及nm23表达的意义
中国医科大学学报2000年第29卷第3期
刘屹立 朴莹 王侠 刘同才 孙志熙 王平 孔垂泽 李昕
摘 要 目的：研究Ki-67、PCNA、nm23基因表达与膀胱移行细胞癌分级、分期及复发的关系, 对预后作出估计。方法：膀胱移行细胞癌石蜡包埋标本44例, 正常对照标本8例。采用免疫组化SABC法, 对标本切片进行染色。结果：Ki-67/MIB-1在G1、G2、G3各级别间及pTa+pT1、pT2、pT3各期别间差异显著(P＜0.05 );PCNA蛋白在 G1+G2和G3间,pTa+pT1和pT2+PT3间差异显著(P＜0.05)。二者表达强度与膀胱癌分级、分期呈正相关性。高表达组的病人，膀胱癌复发率高于低表达组（P＜0.05)。 nm23在低分化和高期别的肿瘤组织中有表达减少的趋势。复发组与未复发组比较，nm23表达无差异性。结论：Ki-67和PCNA的表达可作为膀胱肿瘤预后估计的指标,Ki-67可能会更精确；nm23可能是膀胱癌的抑癌基因。
关键词：膀胱移行细胞癌 复发 基因
为探讨膀胱癌中癌基因的表达与其生物学行为的关系，采取免疫组化SABC法对44例膀胱癌组织中核增殖相关抗原MIB-1、增殖细胞核抗原PCNA、抑癌基因nm23蛋白的表达进行测定。
1 材料与方法
1.1材料来源
1995～1996年我院膀胱移行细胞癌石蜡包埋标本 44 例，男 32 例，女 12 例。年龄 29～76 岁。G1期9例，G2期23例，G3期12例。 pTa11例， pT1 15 例， pT2 11例，pT3 7例。随访 2 年，6 例失访，38 例中 23 例复发，时间间隔 4～ 20个月。8例正常膀胱粘膜标本作对照。
1.2 试剂与方法
一抗鼠抗人Ki-67(MIB-1)抗体，鼠抗人nm23抗体，鼠抗人PCNA抗体，DAB显色剂，SABC免疫组化试剂盒购自博士德公司。采用链霉亲合素-生物素化过氧化酶复合物(SABC)法。免疫组化步骤按试剂盒说明进行，均用微波炉法抗原修复。PBS代替一抗作空白对照。细胞着色棕黄色为阳性。每张切片随机计数 4个视野，每个视野计数200个细胞，共800个细胞，计算阳性细胞所占比率。标准：阳性细胞＜10%为弱阳性(+)，10%～30%为阳性(
)，＞30%为强阳性(
)。统计学计数资料用χ2检验，计量资料用t检验。
2 结果
2.1 MIB-1、PCNA、nm23的表达与膀胱癌分级、分期的关系
MIB-1与PCNA染色定位于细胞核。二者的表达在膀胱癌与正常组织间差异显著(P＜0.05)。MIB-1表达在G1、G2与G3组间，在pTa+pT1与其他分期间有显著差异(P＜0.05) 。PCNA在 G1+G2与G3间，pTa+pT1与pT2+pT3间有显著差异(P＜0.05)。nm23的表达定位在胞浆，随分级、分期的升高有减少趋势，但各组间无显著差异(P＞0.05)。见表1。
表1 MIB-1、PCNA、nm23 在不同期别、级别的膀胱癌组织中的表达(X±s，%)
Table 1 The expression of MIB-1，PCNA，nm23 in the bladder cancer tissues with different stage and grade (X±s，%)
| 项目 |
MIB-1 |
PCNA |
nm23 |
| G1 |
6.7± 3.9 |
5.4±4.0 |
37.7±12.9 |
| G2 |
20.5±16.7 |
17.8±13.2 |
27.1±10.0 |
| G3 |
41.5±19.4 |
39.2±20.5 |
20.4±17.3 |
| pTa |
5.3±4.8 |
7.1±5.1 |
30.5± 9.3 |
| pT1 |
17.2±15.1 |
16.3±10.5 |
24.9±14.6 |
| pT2 |
21.1±17.7 |
19.5±17.1 |
20.2±13.4 |
| pT3 |
40.2±23.7 |
39.6±20.8 |
16.5± 9.8 |
| 正常组织 |
(－) |
(－) |
67.9±19.9 |
2.2 MIB-1、PCNA、nm23的表达与膀胱癌复发的关系
膀胱癌组织中MIB-1及PCNA蛋白呈中高度表达者，膀胱癌复发率比低表达者显著升高（P＜0.05)。 然而在复发组与未复发组比较中，nm23未见统计学意义(P＞0.05)。见表2。
表2 MIB-1，PCNA，nm23的表达与膀胱癌复发的关系
Tab.2 The relationship between the expression of MIB-1，PCNA，nm23 and， the recurrence of bladder cancer
| 项目 |
n |
MIB-1 |
PCNA |
nm23 |
| －/＋ |
/ |
－/＋ |
/ |
－/＋ |
/ |
| 复 发 |
23 |
8 |
15 |
7 |
16 |
10 |
13 |
| 未复发 |
15 |
10 |
5 |
8 |
7 |
7 |
8 |
3 讨论
膀胱移行细胞癌是常见的肿瘤之一，具有易复发性，其复发规律及其与生物学特性的关系至今仍不清楚。Ki-67、PCNA是目前较为肯定的核增殖标志基因。Ki-67表达蛋白为MIB-1，在除G0期以外的细胞周期各时相均有表达，M期达最大表达峰。早期的Ki-67抗体只适用于冰冻标本，DOKA公司推出的新一代抗体可用于石蜡切片，为回顾性研究创造了条件。PCNA在G0、G1期无明显表达, 在G1后期及其他各期表达增加, S期达高峰。但PCNA蛋白表达易受生长因子等因素诱导，而且半衰期长，因此在检测中可能影响结果统计的精确性。在多种肿瘤研究中，Ki-67及PCNA的表达与肿瘤的分期、预后有关。在膀胱移行细胞癌的研究中，国外资料表明二者的表达强度随肿瘤的分级、分期升高而增高，而且高表达率与不良预后密切相关［1,2］。但二者中何者特异性较高尚不肯定。本研究结果提示，总体二者阳性表达率在肿瘤不同级别、期别之间均有差异，提示可以作为肿瘤恶性程度及预后评价的参考指标, 与国外报告基本一致［3］。而比较二者表达发现，在 G1、G2、G3各级间，以及PTa+PT1、PT2、PT3各期间比较，Ki-67均能显现出阳性表达的显著性差别，而PCNA只在G1+G2与 G3、pTa+pT1与pT2+pT3间有统计学意义，提示Ki-67蛋白表达检测的敏感性相对较高，对恶性程度的分辨较为细腻。Ki-67中高度表达的病例中肿瘤复发率为75%, PCNA中高度表达者复发率为69. 2%。上述比较是否能否说明KI-67作为预后估计指标可能优于PCNA，仍需在分子生物学水平做进一步检测。在本研究中，对肿瘤转移抑制基因nm23应用免疫组化法进行了蛋白表达测定，其结果与国内程伟［4］等报告基本一致，提示在分化较低、期别较高的癌组织中其表达为下降趋势，但本组未见统计学差异（P＞0.05)。目前认为nm23为转移抑制基因，资料中统计学比较显著性较差，这可能与本组病例中，肿瘤膀胱外侵袭、淋巴结转移、远隔转移等病例较少有关，可以在今后增大此类样本量继续加以研究。
刘屹立（中国医科大学第一临床学院泌尿外科，沈阳 110001）
朴莹（中国医科大学第一临床学院泌尿外科，沈阳 110001）
王侠（中国医科大学第一临床学院泌尿外科，沈阳 110001）
刘同才（中国医科大学第一临床学院泌尿外科，沈阳 110001）
孙志熙（中国医科大学第一临床学院泌尿外科，沈阳 110001）
王平（中国医科大学第一临床学院泌尿外科，沈阳 110001）
孔垂泽（中国医科大学第一临床学院泌尿外科，沈阳 110001）
李昕（沈阳军区总医院泌尿外科）
参考文献
1，Koyuncuoglu M , Kargi A. Investigation of p53, c-erbB-2, PCNA immunoreactivity, DNA content, AgNOR and apoptosis in bladder carcinoma as prognostic parameters. Cancer Lett, 1998 ,126(2):143—148
2，Asakura T, Takano Y, Iki M,et al. Prognostic value of Ki-67 for recurrence and progression of superficial bladder cancer. J Urol, 1997 , 158(2):385—388
3，Golam M ,Keiji K ,Hiromi K ,et al. The proliferation index of MIB-1 as a prognostic factor for patients with transitional cell carcinoma of the upper urinary tract.Cancer,1996,78(4):827—833
4，程伟，邵国兴，赵世平,等.nm23基因产物/NDPK在膀胱癌中的表达及其临床意义. 中华泌尿外科杂志,1997,18(7):440～441
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