脾切除对诱发性肝癌大鼠免疫功能的影响

中国普外基础与临床杂志 2000年第4期第7卷 基础与实验研究

作者：邱培才　陈积圣

单位：邱培才（汕头市中心医院普外科　汕头　515031）；陈积圣（中山医科大学孙逸仙纪念医院　广州　510120）

　　关键词： 脾脏；脾切除术；抗肿瘤免疫；诱发性肝癌；动物实验

　　【摘要】　目的　探讨脾切除对诱发性肝癌大鼠抗肿瘤免疫功能的影响。方法　在大鼠诱发肝癌后的第2和第4个月时，检测脾切除组和对照组大鼠的NK细胞活性、TNF-α及淋巴细胞数的变化。结果　脾切除组大鼠NK细胞活性与对照组比较其差异具有显著性意义(P＜0.05)，但外周血淋巴细胞计数、TNF-α水平与对照组比较差异无显著性性（P＞0.05)。结论　脾切除后对诱发性肝癌大鼠的抗肿瘤免疫功能有一定的影响，表现为NK细胞活性持续降低，而淋巴细胞计数和细胞因子TNF-α经过一段时间后可恢复到正常水平，与对照组比较无明显差异。

　　【中图分类号】　R730.3； R657.6　　　【文献标识码】　A

　　【文章编号】　1007-9424(2000)04-0224-02

EFFECTS OF SPLENECTOMY ON ANTI-TUMOR IMMUNITY DURING THE INDUCTION OF HEPATOCELLULAR CARCINOMA IN RATS

QIU Pei-cai

　　（Department of General Surgery, The Central Hospital of Shantou, Shantou 515031）

　　CHEN Ji-sheng

　　【Abstract】　Objective　To study the effect of splenectomy on the anti-tumor immunity in rats with induced hepatocellular carcinoma(HCC). Methods　At the second and fourth month of the induced HCC, the NK cell activity, TNF-α level and total lymphcyte in blood were measured in the group of splenectomy and the control group. Results　There were no different in the total lymphcyte and TNF-α in the blood in two groups, but there were significant difference in the NK cell activity between the group of splenectomy and the control group (P＜0.05). Conclusion　There are some change in the anti-tumor immunity after splenectomy in rats, in which NK cell activity is at low level continuously. tNF-α isn′t affected after the second month after splenectomy.

　　【Key words】　Spleen　　Splenectomy　　Anti-tumor immunity　　Induced liver cancer　　Animal experimentation

　　脾脏是机体内最大的外周免疫器官，脾切除后机体容易发生脾切除术后凶险性感染(OPSI)，而且近20年来，很多研究已发现脾脏在抗肿瘤免疫作用中发挥了一定的作用^〔1〕。本研究以诱发性肝癌大鼠为对象，观察脾切除对其抗肿瘤免疫功能的影响。

　　1　材料与方法

　　1.1　实验动物及分组

　　纯系雄性SD大鼠80只，体重120～160 g，购于广东省计划生育科技研究所。将动物编号后按随机数字表法将大鼠随机分为两组，每组各40只。

　　1.2　方法

　　大鼠术前禁食8～12小时，称重后麻醉，而后按分组要求施行手术。脾切除组：将脾脏完全游离后切除，如发现有副脾也一并切除； 模拟手术组： 同脾切除组一样将脾脏完全游离，但不予切除。术后动物按6～8只一笼，分笼混合饲养，保持环境和饲养条件一致。术后10～14天开始投二乙基亚硝胺(DEN)液口服诱癌。DEN由中科院南京土壤研究所提供，DEN液按0.016%浓度配制，让大鼠自由饮用。

　　动物开始诱癌后，经常观察动物的活动和反应情况。在动物诱癌的第2和第4个月时，每组动物各取20只，先从鼠尾静脉采血作白细胞和分类计数，推算出外周血淋巴细胞绝对数； 然后麻醉动物从其心脏采血5～6 ml抗凝送检： 先分离NK细胞，用MTT酶标法检测NK细胞的活性，所用靶细胞为K562(中山医大肿瘤研究所提供)； 分离细胞后的血清，采用双抗体夹心法检测血清中的TNF-α含量(试剂由军事医学科学院北京四环医学高技术开发部提供)。

　　1.3　统计学处理

　　采用t检测。

　　2　结果

　　用DEN诱癌2月和4月后，两组动物间外周血NK细胞活性差异有显著性意义(P＜0.05)，但TNF-α和淋巴细胞数两组之间差异均无显著性意义(P＞0.05)，见附表。

附表　用DEN诱癌第2和第4个月时大鼠免疫功能的变化(±s)

　　3　讨论

　　脾脏是机体内最大的淋巴器官，也是滤过血液的唯一淋巴组织，它含有大量的淋巴细胞、吞噬细胞、NK细胞和K细胞等，具有全身特异性和非特异性免疫功能。研究证明脾脏与肿瘤的关系密切，人类脾脏本身的恶性肿瘤，不论原发还是继发，都比其它实质性脏器少得多^〔2〕。还有研究表明，脾切除后能影响肿瘤的生长，促进肿瘤的扩散，使动物的生存时间缩短^〔3，4〕。我们的研究表明，脾切除对大鼠诱发性肝癌的发生发展过程有促进作用，大鼠口服DEN后一般两个月左右出现诱发性肝癌，4个月时肝癌已很明显，脾切除动物较对照组肝癌发生更多，发展更快，动物死亡率更高^〔5〕。

　　脾切除术后导致机体体液免疫和细胞免疫功能的紊乱已屡见报道^〔6〕，机体抗肿瘤免疫的主要成员之一是细胞免疫，T淋巴细胞起着极其重要的作用。已有多篇文献报告脾切除后机体T淋巴细胞总数减少和T淋巴细胞亚群的比例失调，从而影响T淋巴细胞的功能^〔7〕。本研究在大鼠脾切除后用DEN诱发肝癌的2月和4月时，检测其外周血淋巴细胞总数的变化，结果与对照组之间的差异无统计学意义，说明脾切除后2月和4月时对淋巴细胞总数的变化无明显影响。

　　NK细胞是机体免疫防御系统的主要成员之一，它不仅能非特异性地溶解某些癌细胞，而且还通过抗体依赖性细胞毒性(ADCC)效应杀伤肿瘤细胞，是机体抵抗癌肿生长、扩散和转移的自然防御系统^〔8〕。本研究中脾切除组NK细胞活性明显下降并持续4个月以上，与对照组相比有显著性差异，说明脾切除对机体抗肿瘤免疫功能有直接的影响。

　　肿瘤坏死因子(TNF)是单核巨噬细胞或淋巴细胞产生的一种具有重要生物活性的细胞因子。体内外的实验证明，TNF对多种肿瘤细胞有直接的杀伤作用，而且具有重要的免疫调节作用。脾脏具有大量的巨噬细胞和淋巴细胞。为了解脾切除对TNF是否产生影响，本研究检测了动物脾切除术后2月和4月时血清中TNF-α的含量变化，结果显示与对照组相比其差异无统计学意义，说明动物脾切除后2月和4月时对大鼠TNF-α的变化无明显影响。

　　令人遗憾的是，本研究在切脾前及用DEN诱癌前未测定本研究3项检测指标的基础值，以至难于得出相应结论，值得今后弥补。

　　【作者简介】　邱培才(1964年-)，男，重庆市人，医学硕士，主治医师，主要研究方向为肝、胆、脾。

参考文献

　　1，Mellemkjoer L, Olsen JH, Linet MS, et al. Cancer risk after splenectomy 〔J〕. Cancer, 1995; 75(2)∶577

　　2，姚榛祥， 吴诚义. 脾脏肿瘤 〔J〕. 普外临床， 1989； 4(5)∶313

　　3，Catane R, Schlanger S, Weiss L, et al. Toxicology and antitumor activity of tuftsin 〔J〕. Ann N Y Acad Sci, 1983; 419(1)∶251

　　4，Witting CH, Hultsch E. Effect of splenectomy on B-and T-lymphocytes and a benzprene-induced munine sarcoma 〔J〕. A Krebforsch, 1978; 92(2)∶267

　　5，邱培才， 陈积圣. 脾切除对大鼠诱发性肝癌过程的影响 〔J〕. 现代临床普通外科， 1997； 2(4)∶231

　　6，Llende M, Santiago-Delpin EA, Lavergne L. Immunobiological consequence of splenectomy: a review 〔J〕. J Surg Res, 1986; 40(1)∶85

　　7，仇登波， 黄　韬， 黄文广等. 脾脏对胃癌患者免疫状态的影响 〔J〕. 中华医学杂志， 1992； 72(6)∶334

　　8，Paolo A. Distribution of natural kill cell activity in peripheral blood, card blood, thymus, lymph nodes and spleen and the effect of in vitro treatment with interferon pregaration 〔J〕. Clin Immune Immunopath, 1981; 19(1)∶161

(1999-07-20收稿，1999-12-10修回)