冻融附睾精子卵浆内显微注射治疗阻塞性无精子症不育

中华泌尿外科杂志 1999年第6期第20卷 论著摘要

作者：李满　庄广伦　李蓉

单位：510080广州，中山医科大学附属第一医院生殖医学研究中心

　　附睾取精结合卵浆内单精子注射(ICSI）治疗无精子症不育时，若将多余附睾精子冻存，当患者再次助孕治疗时，可用冻融附睾精子行ICSI，避免再次附睾手术的损伤，我们采用此方法治疗3对无精子症不育夫妇。报告如下。

　　材料与方法　3例患者中，2例为先天性输精管缺如，1例为炎性阻塞。女方平均年龄36（32～39）岁，男方平均年龄38（35～39）岁。2例切开附睾及1例经皮附睾穿剌抽吸附睾液分离精子进行ICSI^［1］，多余精子加入冷冻保护液，平衡15分钟，程序降温后置液氮保存。

　　超排卵治疗采用本中心常规方案^［2］,当卵泡发育成熟时，阴道B超引导下取卵，获得的卵母细胞置培养液中培养。取卵后将精子冷冻管从液氮中取出，置37℃水浴融解，吸出置离心管中加入3～4倍的培养液，离心，留沉淀待用。卵母细胞去颗粒细胞后，加入Falcon1 006皿的 Hepes液滴中，将上述含精子的沉淀液置 Hepes液与10%PVP液滴旁边。从含精子的液滴中吸取活动精子，在10%PVP液中冲洗并制动，注入卵母细胞内。将注射后的卵母细胞置Earle+10%灭活血清的培养液中继续培养，16～18小时后观察受精情况，44～48小时观察卵裂，选择评分高的胚胎移植。

　　结　果　3例附睾精子冻存前平均数量为17×10⁶/ml，10%～20%呈1～2级活动，冻融后仅1%～2%精子有微弱活动。3例患者共获MⅡ卵母细胞34个，受精24个（占71%），平均移植3个胚胎，2例妊娠，其中1例孕12周流产，另1例双胎妊娠，于1998年12月9日孕36⁺³周剖宫产2男婴。

　　讨　论　精子冻存是一种成熟的助孕技术，应用广泛。但是附睾精子冻融后活动率明显下降，本研究活动精子数冻融前后相比，下降了30%～80%，活动力也明显下降，这是由于长期贮存于附睾，部分已发生了退化变性，存活能力降低，耐受冻融能力较差。尽管如此只要有活精子，借助ICSI仍然可达到受精^［3］。从混有大量死亡精子，血细胞等杂质及大量冷冻保护剂及其沉淀中寻找数条微弱活动的精子行ICSI，增加了显微操作困难。而精子处理方法决定了ICSI能否顺利进行，常规用percoll梯度离心法分离精子，此法收集精子率为20%^［4］，而且冷冻保护剂沉淀又不能通过此法去除，因此我们直接将含冷冻保护剂的精子沉淀放入ICSI皿中，等活动精子游至液滴边缘或利用注射针吸取微弱活动精子在PVP液中反复冲洗干净，以克服活动精子少杂质多带来的困难，进行ICSI，仍有可能达到受精、妊娠及生育。

　　参考文献

　　1　李满，庄广伦，李蓉，等.附睾、睾丸精子卵浆内单精子注射治疗阻塞性无精症引起不育.中华泌尿外科杂志,1998，19∶625-627.

　　2　庄广伦，顾正田，周灿权.Buserelin在超排卵周期中的作用及对卵泡液的影响.中华妇产科杂志，1993，28∶10-12.

　　3　Holden CA, Fuscaldo GF, Southwick GJ, et al. Frozen-thawed epididymal spermatozoa for intracytoplasmic sperm injection. Fertil Steril,1997,67∶81-87.

　　4　Mortimer D. Sperm recovery techniques to miximize fertilizing capacity. reprod Fertil Dev, 1994,6∶25-31.

(收稿：1998-08-24　修回：1999-01-25)