幽门螺杆菌基因的检测与分型

中华医学检验杂志 2000年第1期第23卷 简报

作者：杨学文　王礼文　陈云峰　缪界平　陈亚军

单位：杨学文（210029 南京，江苏省中医院）；王礼文（210029 南京，江苏省中医院）；陈云峰（210029 南京，江苏省中医院）；缪界平（210029 南京，江苏省中医院）；陈亚军（210029 南京，江苏省中医院）

　　我们用幽门螺杆菌(Hp)空泡毒素(vacA)和细胞毒相关蛋白(cagA)基因检测以及vacA基因分型的聚合酶链反应(PCR)方法，并对幽门螺杆菌vacA基因型和cagA状态的关系作了调查，报告如下。

　　一、材料和方法

　　1. 标本：48株Hp临床分离株和124份用我院自制采样器所取Hp阳性胃粘液标本^［1］，经PCR检测Hp16S rRNA基因和尿素酶试验以及¹⁴C呼气试验确定为Hp阳性的标本。以上取样的172位Hp阳性患者中，经内窥镜取样病检诊断为萎缩性胃炎（AG+CAG）的患者为49例，浅表性胃炎（SG+CSG）的患者为64例。

　　2．试剂：Taq DNA聚合酶、PCR markers为Promega产品。

　　3．引物：见参考文献［2］设计。

　　4．DNA提取：见参考文献［1］。

　　5．Hp cagA基因PCR检测：用引物cagA-F和cagA-R进行PCR反应，扩增程序为94℃预变性3 min，94℃20sec、60℃20 sec、72℃ 30 sec，共35个循环，最后72℃延伸5 min。

　　6．Hp vacA基因及其亚型的检测：用相应引物进行PCR扩增，进行vacA基因检测时退火温度为55℃，vacA基因型检测时退火温度为58℃，其余反应条件同上。

　　二、结果

　　1. cagA、vacA基因检测结果：172份Hp-DNA标本共检出vacA阳性172份，阳性率100%；cagA阳性93份，阳性率54.07%，其中49例CAG患者的标本cagA阳性47例（95.92%），64例CSG患者的标本中cagA阳性28份（43.75%），两者差异有显著意义（P＜0.05）。

　　2．vacA基因型检测结果：利用不同的引物分别对172份Hp-DNA标本进行扩增，中间区域型m1和m2分别为80和92例，两者差异无显著意义（P＞0.05）；信号序列型s1a、s1b、s2分别为82、68、22，s1a与s1b之间无明显差异（P＞0.05），s1a、s1b、s1(s1a+s1b) 型明显多于s2型(P＜0.05)。检出所有的6种信号序列/中间区域组合型，s1b/m1和s1a/m2分别为48和52例，明显多于其他基因型(P＜0.05)，s2/m1仅为2例，明显少于其他基因型(P＜0.01)，差异有非常显著意义。

　　3．Hp vacA基因型与cagA基因的关系：将Hp的vacA中间区域型和信号序列型的可能的几种组合（s1/m1、s1/m2、s2/m1、s2/m2）与cagA状态进行统计分析，s1/m1、s1/m2型的cagA阳性数分别为45和48，两者无显著差异，s2/m1、s2/m2型的cagA阳性数均为0，结果显示，s1/m1、s1/m2型的cagA阳性数显著高于s2/m1、s2/m2型。

参考文献

　　1　王礼文, 杨学文, 李克涓, 等.非损伤性胃内采样法用于诊断幽门螺杆菌感染.中华医学检验杂志, 1998, 21: 243.

　　2　Ito Y, Azuma T, Ito S, et al. Analysis and typing of the vacA gene from cagA-positive strains of Helicobacter pylori isolated in Japan. J Clin Microbiol,1997, 35: 1710-1714.

收稿日期：1999-04-15