第二节 甘油三酯测定
甘油三酯又称中性脂肪，由于其甘油骨架上分别结合了3分子脂肪酸、2分子脂肪酸或1分子脂肪酸，相应称为甘油三酯（TG）、甘油二酯（DG）和甘油一酯（MG）。血清中90%～95%是TG，TG中结合的脂肪酸分别为油酸（44%）、软脂酸（26%）、亚油酸（16%）和棕榈油酸（7%）。
血清TG测定方法一般分为物理化学法、化学法及酶法三大类。
血清中TG的化学组成并不单一，准确求其分子较为困难。因标准不同，测定结果存在差异。化学法多采用三棕榈精（软脂精）（分子量807.3）、三油精（分子量895.4）为标准，按摩尔浓度计算。酶法测定以三油精为标准物进行换算。
1．化学法
化学测定法包括：①TG的抽提分离；②皂化；③甘油糖的氧化；④氧化生成甲掌显色定量等四个阶段。操作较为繁杂，影响测定因素太多，本法准确性差，一般很少用。
2．酶法测定
酶法测定包括：①TG的抽提与皂化；②加水分解生成甘油糖定量等二个阶段。目前常规检测应用的方法有甘油激酶（glycerol kinase,GK）法和甘油氧化酶（glycerol Oxidase,GOD）法。操作简便，快速准确，并能在自动化生化分析仪上进行批量测定。
一、乙酰丙酮法
1．原理
血清中加入异丙醇抽提取甘油三酯，经KOH皂化使甘油三酯水解生成甘油及脂肪酸，甘油在过碘酸作用下氧化成甲醛，在氯离子存在下甲醛与乙酰丙酮缩合生成黄色的3，5二乙酰，1，4二氢甲基吡啶，其颜色的深浅与甘油三酯的含量成正比，420nm测定定量。该法可用于基本功训练及组织细胞TG的提取测定。
2．试剂组成
| 代号 |
种类 |
浓度 |
组成 |
贮2-8℃ |
有效时间 |
| R1 |
抽提液 |
|
（CH3）CHOH（A.R）重蒸馏 |
|
|
| R2 |
吸附剂 |
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氧化铝，水洗除去微细颗粒，
110℃烤干3h以上 |
闭封 |
一周 |
| R3 |
皂化剂 |
5% |
KOH 5g+H2O→100ml |
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| R4 |
醋酸溶液 |
2mol/L |
CH3COOH 11.5ml+H2O→100ml |
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|
| R5 |
过碘酸钠 |
0.05mol/L |
NaIO4 1.07g+H2O→100ml |
|
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| R6 |
氧化剂 |
|
R4 1体积+R51体积 |
|
一周 |
| R7 |
醋酸铵液 |
|
CH3COONH2 15.4g+H2O→100ml |
|
|
| R8 |
显色剂 |
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CH3COCH2COCH30.75ml+R-1 |
|
|
| 40ml+R-7 100ml+R-4 80ml |
| R9 |
参考液 |
2mg/dl |
三油酸甘油酯 2mg+R-1→100ml（TG100mg/dl） |
|
|
3．操作
按图15-3操作。
图15-3 血清甘油三酯（乙酯丙酮法）测定操作图
4．计算
血清TG浓度=ESA/EST×1.13(mmol/L)
二、酶法（GK-GPO-POD比色法）
血清中甘油三酯经脂肪酶水解为甘油和脂肪酸，甘油在甘油激酶（GK）及ATP存在下，生成3-磷酸甘油，尔后，在磷酸甘油氧化酶（GPO）作用氧化成磷酸二羟丙酮并生成H2O2，H2O2与底物4-氨基安替比林和ESPAS在过氧化物酶（POD）作用下，生成红色亚醌化合物（quinoneimine），比色（500nm），其颜色深浅与甘油三酯含量成正比。
（一）手工测定法
1．试剂组成
| 代号 |
种类 |
浓度 |
贮存2～8℃ |
| R1 |
磷酸甘油氧化酶 |
≥3.0KU/L |
冷藏 |
| （A液） |
抗坏血酸氧化酶 |
≥1.0KU/L |
|
|
甘油激酶 |
≥0.7KU/L |
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|
4-氨基安替比林 |
80mg/L |
|
| R2 |
脂蛋白脂酶 |
≥2.0KU/L |
冷藏 |
|
过氧化物酶 |
≥10KU/L |
|
|
ESPAS |
300mg/L |
|
| R3（参考液） |
甘油酸三脂 |
200mg/dl（2.26mmol/L） |
冷藏 |
*：一般采用商品试剂盒
图15-4 血清甘油三酯测定法（酶法）操作图
2．操作
按图15-4操作。
3．计算
血清TG浓度=ESA/EST×2.26(mmol/L)
（二）生化分析仪检测
全自动生化分析仪测定操作（以CL-7200型为例）。
1．试剂
A液：GK，GPO，4-AA-P、抗坏血酸氧化酶等。
B液：POD，Lipase,ESPAS等。
标准液：甘油三油酸酯 200mg/dl(2.26mmol/L)。
2．上机参数
| 名称 |
参数 |
| 方法 |
终点法 |
| 波长 |
双波长（540nm 700nm） |
| 试剂A反应时间 |
2～3min |
| 试剂B反应时间 |
5～6min |
| 反应温度 |
37℃ |
| 样本用量 |
4μl |
| 试剂A用量 |
200μl |
| 试剂B用量 |
100μl |
| 单位 |
mmol/L |
3．操作过程
4．计算
以△A=A2-A1并根据同样之标准或质控物计算，自动打印结果。
5．注意事项
①试剂与样本量可根据分析仪要求按比例改变。
②试剂在有效期内2～8℃避光保存。
③样本中甘油三酯含量超过11mmol/L需用生理盐水稀释后再测。