经内镜直接检测幽门螺杆菌的基础与临床研究
自1983年Warren和Marshall报告，从胃炎患者胃粘膜分离幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）以来，越来越多的资料表明，Hp与慢性胃炎，消化性溃疡关系密切，历此，为了有效的防治Hp相关慢性胃炎、消化性溃疡等疾病，需要一种快速、准确而直观的检测Hp手段。目前，检测Hp手段较多，包括：切片法、涂片法、刷检法、培养法、尿素酶法、13C呼气试验法及抗体检法等。这些方法归纳起来，有以下缺点：①需取材标—费事；②标本需要处理—费时间；③作者的新鲜胃切除标本实验表明，Hp在胃内的分布并非均匀，如局部取样检测，不可避免的出现假阴性。那么，能否将胃内的Hp检测直观化呢？就此问题，我们进行基础及临床的探讨。
1 基础研究
1.1 原 理
幽门螺杆菌是栖息在胃粘膜的革兰阴性螺旋状短杆菌，具有强的尿素酶科活性，将尿素分解成氨和二氧化碳，氨属碱性，提高胃内pH值，使含有酚红的试剂由桔黄色变成粉红色或红色。
1.2 试剂的研制
确定一定浓度的Hp分解尿素，改变pH值，使试剂颜色改变的尿素和酚红的浓度。方法是将一定浓度的幽门螺杆菌，即5×10CFU/ML分别加入不同浓度尿素和酚红溶液中，观察其颜色变化（表1）。
实验结果表明，一定浓度的Hp分解尿素，改变pH值，使试剂颜色改变的尿素和酚红的最适宜浓度分别为0.5mol/L及0.025％
表1 不同浓度素与酚红溶液中Hp的颜色
尿素浓度（mol/L） |
酚浓度（％） |
颜色变化 |
0.1 |
0.005 |
－ |
0.2 |
0.010 |
－ |
0.3 |
0.015 |
－ |
0.4 |
0.020 |
－ |
0.45 |
0.025 |
＋ |
1.3 Hp分解尿素的适宜pH
我们配成上述试剂后喷洒于胃粘膜，发现除极个别病例胃粘膜着粉红色或红色，绝大多数病例并不着色，这是什么原因呢?后来发现Hp菌体所含的尿素酶，分解尿素的最适宜pH值为5～8，而慢性胃炎，尤其是消化性溃疡病人的pH值多在1～3，我们认为使Hp分解尿素，必须改胃内的pH值，根据胃酸泵抑制剂奥美拉唑和胃H2受体阻滞剂Famotidine20mg或检查前1h静脉注射Famotidine 20mg，检测慢性胃炎，消化性溃疡共30例，用pH检测慢性胃炎，消化性溃疡共30例，用pH检测导管从胃镜活检孔插入检测胃pH值，结果pH值为5.0～5.5，2例；5.6～6.0，15例；6.1～6.5，8例；6.6～7.0，5例。
以上结果表明，检查前1a晚上服奥美拉唑20mg，或检查前1h静脉注射famotidine 20mg，胃pH值达到5.0～7.0。
2 临床研究
2.1 对象与方法
本组175例均经GIF—100型电子胃镜诊断，其中慢性胃炎100例，胃溃疡25例，十二指肠溃疡50例。检查前1d晚上口服奥美拉唑20mg。插入胃镜后先将胃液抽空，胃窦、胃角及胃体各取1块活检做切片，吉姆萨染色、检测Hp，以作与喷洒法相对照。然后经塑料管注入我消化实验室研制的试剂喷洒于胃窦、胃角、胃体及溃疡周围，观察颜色变化，胃粘膜被染成粉红色或红色为阳性。
3 结果 见表2，表3。
表2 试剂喷洒与切片法相对照结果
方 法 |
慢性胃炎
（n：100） |
胃溃疡
（n：25） |
十二指肠溃疡
（n：50） |
切片法Hp阳性率(％) |
50.0 |
72.0 |
80.0 |
试剂喷洒Hp阳性率(％) |
68.0 |
80.0 |
90.0 |
表3 慢性胃炎、胃溃疡、十二指溃疡的染类型（％）
试剂反应 |
n |
弥慢性着色 |
局灶性着色 |
散在性着色 |
不着色 |
慢性胃炎 |
100 |
57(57.0) |
2(2.0) |
9(9.0) |
32(32.0) |
胃溃疡 |
25 |
13(52.0) |
5(20.0) |
2(8.0) |
5(20.0) |
十二指溃疡 |
50 |
34(68.0) |
4(8.0) |
7(14.0) |
5(100.0) |
4 讨论
目前，检测Hp的方法较多，包括切片法、涂片法、刷检法、培养法、尿素酶法、13C呼气试验法及抗体检测法等。这些检查均需一定的时间，1988年作者研制的快速Hp检测试剂，只需几秒至1min以内即可检测Hp，但其缺点是取胃粘膜活检的局限性可能出现假阴性。本方法是Hp菌体内含有丰富的尿素酶—分解尿素—改变pH（偏碱性）—试剂由桔黄色变为粉红色或红色的原理设计。伊藤报告Hp尿素酶活性的适宜pH值为5.0左右。我们从临床试验验证，病人在受检前一天晚上，服胃酸泵抑制剂奥美拉唑20mg或胃组织胺H2受体阻滞剂famotidine 20mg静脉注射60min后，胃pH值达到5～7。
作者采用新鲜胃切除标本反复检测Hp结果表明，Hp在胃粘膜的分布并非均一，提示胃粘活检检法检测Hp可能出现假阴性，本方法可除假阴性。
本文慢性胃炎100例的着色率为68％，切片法Hp阳性率为60％，胃溃疡25例的着色率为80％，切片法Hp阳性率为72％，十二指肠溃疡50例的着色率为90％，切片法Hp阳性率为80％，提示切片法确有假阴性。
内镜下胃粘膜萎缩轻中度的17例中5例呈弥漫性着色，2例呈散在性着色，而胃粘膜萎缩明显的4例均不着色。另外，本文还提示，胃内Hp的分布以幽门腺领域为多，越向胃底腺区，Hp的分布也越稀疏。胃溃疡25例中13例呈弥漫性着色，5例呈局灶性着色，2例呈散在性着色，且在这些着色的部位中均检出Hp，令人感兴趣的是7例胃溃疡周围粘膜呈深着色，其中包括难治性胃溃疡3例。十二指肠溃疡50例中34例（68.0％）呈弥漫性着色，4例（8.0％）呈局灶性着色，7例（14.0％）呈散在性着色，在这些着色组织中均检出Hp。
本文资料还表明，Hp阳性的胃及十二指肠溃疡较阴性者治愈时间延长，且复发率也高。上述结果表明，在治疗慢性胃炎和消化性溃疡的过程中必须清除Hp，本文则提供了在内镜下直接清除Hp的广阔前景。内镜下喷洒药物直接清除Hp的临床实验正在进行。
李增灿 陈频佳 侯 鹏 陈 田 李 扬
解放军211医院消化内科（哈尔滨 150080）