大鼠卵巢肿瘤模型和癌细胞粘附腹膜模型的建立
中华妇产科杂志 1999年第3期第0卷 论著摘要
作者：程湘 程天民
单位：400038 重庆，第三军医大学预防医学系防原教研室
建立动物肿瘤模型，是研究人类肿瘤生物学行为和抗肿瘤治疗的重要基础工作。我们采用二甲基苯蒽(DMBA)埋线法，成功地建立了大鼠卵巢肿瘤模型，并建立了癌细胞体外粘附腹膜模型，为深入研究卵巢癌的发病机理提供实验方法。
一、材料与方法
1. 实验材料：致癌剂为二甲基苯蒽(美国Sigma公司产品)。实验动物为Wistar大鼠，共45只，雌性，6～8周龄，体重60～100mg。腹膜组织取自大鼠的壁层腹膜。
2.肿瘤模型的建立：二甲基苯蒽加温融化后，将棉线浸入药液内，每根含约0.2mg， 制备含致癌剂棉线。动物经乙醚麻醉后开腹，将含药棉线埋入卵巢内关腹。 常规喂养。每5周进行腹部触诊，取荷瘤鼠股动静脉放血处死，开胸、开腹观察局部肿瘤情况和全身脏器肿瘤转移情况。肿瘤组织行常规病理学检查。
3.癌细胞粘附腹膜模型的建立：大鼠颈脱臼处死，开腹取腹膜组织，间皮面向上，用丝线固定于直径3 cm的塑料管上，内加培养液。将对数生长期癌细胞制备细胞悬液，加入塑料管内，常温下孵育1.5小时，于0、30、60和90分钟各时相点，每管中取0.6ml细胞悬液，加入96孔板中，经四甲基偶氮唑蓝比色法测定细胞数后，计算各时相点癌细胞粘附率。粘附率计算公式为：(1-各时相点吸光度值/O时吸光度值)×100%。
二、结果
1.给药后不同时间卵巢肿瘤的发生情况：45只大鼠中，发生卵巢肿瘤32只(71.1%) 。给药后不同时间卵巢肿瘤发生例数及累积发生率见表1。30只大鼠的卵巢肿瘤发生于给药后26～45周。发生卵巢肿瘤的32只大鼠中，恶性肿瘤29只，占90.6%，部分大鼠可见肿瘤腹腔播散至心、肺、肝、肾、淋巴结等处。
表1 32只大鼠给药后不同时间大鼠卵巢肿瘤累积发生率
| 给药后时间(周数) |
大鼠发生卵巢肿瘤(只数) |
累积发生率(%) |
| 1～25 |
2 |
4.5 |
| 26～30 |
6 |
17.8 |
| 31～35 |
5 |
28.9 |
| 36～40 |
6 |
42.2 |
| 41～45 |
5 |
53.3 |
| 46～50 |
4 |
62.2 |
| 51～70 |
4 |
71.1 |
| 合计 |
32 |
71.1 |
2.癌细胞浓度和容积对癌细胞粘附率的影响：在细胞悬液量相同，加入塑料管内的癌细胞浓度分别为20、10、2和1×103ml时，癌细胞的粘附率依次为39.1、33.5、21.8和14.7%，与加入的细胞浓度呈正相关(r=0.942 1,P＞0.05)。在细胞浓度相同，加入塑料管内的癌细胞悬液量分别为1.5、2.5和3.5 ml时，癌细胞的粘附率依次为35、50和35%，与加入的细胞悬液量无显著正相关(r=0,P＞0.05)。
三、讨论
1.大鼠卵巢肿瘤模型的建立：对卵巢癌发病机理的深入研究，需要有合适的动物模型。以往报道较多的是人卵巢癌裸鼠体内移植模型，由于是异种移植，其应用范围受到限制。Dary等［1］及Kato等［2］建立了较好的大鼠原位肿瘤模型，观察时间至给药后50周［1,2］ 。我们采用DMBA埋线法，成功地建立了大鼠卵巢肿瘤模型，并观察至给药后70周，发现该模型的肿瘤发生率高，组织学类型以恶性为主，有多途径转移等特点。这种模型既有癌发生，又有癌转移，可用于卵巢癌的实验研究。
2.大鼠卵巢癌细胞体外粘附腹膜模型：进行卵巢癌细胞粘附腹膜的机理研究，需要有合适的体外模型，有关的报道极少。有的作者采用卵巢癌细胞与体外培养的间皮细胞的粘附模型，另有作者采用小鼠腹膜覆盖培养板的粘附模型，这些模型在应用中不能较好地模拟在体外情况和进行处理因素的观察［3,4］ 。我们建立的体外粘附腹膜模型，具有能较好地模拟在体情况和进行处理因素观察的优点，计算较准确。在动物实验中我们观察到，当细胞悬液量相同时，癌细胞的粘附率与浓度呈正相关，而当细胞浓度相同时，加入的细胞悬液量与癌细胞粘附率无显著正相关。目前，应用这一模型，进行的卵巢癌细胞CD44表达与其粘附能力相关性的研究，已获得较好结果［5］ 。这一模型的建立，将有利于癌细胞粘附腹膜机理的研究。
参考文献
1 Dary M, Mossige J, Johannessen JV. Heterologous growth of human ovarian cancer.Acta Obstet Gynecol Scand, 1977,56:55-59.
2 Kato T, Yakushiji M, Tsunawaki A, et al. Studies on experimental formation of ovarian tumors. Kurume Med, 1975,22:169-176.
3 Cannistra SA,Kansas GS.Niiloff J,et al.Binding of ovarian cancer cells to peritoneal mesothelium in vitro is partly mediated by CD44H. Cancer Res, 1993,53:3830-3838.
4 Asao T,Nagamachi Y,Morinagn N,et al.Fucosyltransferases of the peritoneum con-tributed to the adhesion of cancer cells to the mesothelium. Cancer, 1995,75:1539-1544.
5 程湘，程天民. 卵巢癌腹腔播散机理与放化疗作用的实验研究. 第三军医大学学报，1998,20:7-10.
(收稿：1998-03-21 修回：1998-12-22)
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