乳腺不典型增生及乳腺癌中Tenascin的表达

中国普外基础与临床杂志 1999年第5期第6卷 基础与实验研究

作者：韩晓蓉　姜　军　马宏敏

单位：第三军医大学西南医院普通外科(重庆　400038)

　　关键词： 不典型增生；乳腺癌；Tenascin

　　摘要　为观察Tenascin(TN)在乳腺不典型增生癌变过程中的表达变化，采用SP免疫组化染色法检测了50例不同乳腺组织中TN的表达情况。结果显示： 正常及Ⅰ级增生的乳腺组织中无TN表达，2例Ⅱ级不典型增生的乳腺组织中有TN表达，Ⅲ级不典型增生及浸润性导管癌中TN表达阳性率分别为80%和90%，与Ⅱ级不典型增生相比明显增高(P＜0.01)。部分癌细胞胞浆中也有TN表达。本实验结果提示，重度不典型增生的乳腺组织间质中TN的表达可能起限制不典型增生细胞向外生长的作用。

TENASCIN EXPRESSION IN ATYPICAL HYPERPLASIA OF MAMMARY AND INFILTRATING DUCTAL BREAST CANCER

Han Xiaorong, Jiang Jun, Ma Hongmin.

　　Department of General Surgery, South West Hospital, Third Military Medical University, Chongqing 400038

　　Abstract　To investigate the changes of tenascin (TN) expression during the course of canceration through atypical hyperplasia of breast epithelia. The SP immunohistochemical method was used to study TN expresson in 50 different breast tissues. Results: There was no TN expression in normal breast and grade Ⅰ hyperplasia; immunostaining of TN was detected in 2 cases with grade Ⅱ atypical hyperplasia; the expression of TN in grade Ⅲ atypical hyperplasia (80%) and infiltrating ductal breast cancer (90%) was significantly higher than that in grade Ⅱ atypical hyperplasia (20%); and immunostaining of TN was detected in part of the cancer cells. Conclusion: These results suggest that TN expression in the stroma of serious atypical hyperplasia may play a role in limiting the outgrowth of hyperplastic epithelia.

　　Key words　　Atypical hyperplasia　　Breast cancer　　Tenascin

　　Tenascin(TN)是细胞外基质中一种高分子量糖蛋白，在胚胎时期各种组织中均有广泛表达，在成熟组织中没有或仅有少量表达，而在多种肿瘤组织中都有突出表达^〔1〕。目前的文献报告对TN在肿瘤中的表达研究较多，而对其在肿瘤发生过程中的表达研究报道较少。本实验分别对正常乳腺组织、乳腺上皮细胞Ⅰ级增生及Ⅱ、Ⅲ级不典型增生的乳腺组织和乳腺癌中的TN表达进行免疫组化观察，了解TN染色的变化情况，从而为乳腺良性疾病癌变机理的研究提供一定的实验数据。

　　1　材料与方法

　　1.1　标本来源

　　随机选取我院近3年的乳腺手术切除标本50例，患者年龄19～64岁。50例中正常乳腺组织10例； 乳腺囊性增生病30例，其中乳腺上皮细胞Ⅰ级增生和Ⅱ、Ⅲ级不典型增生者各10例； 乳腺浸润性导管癌10例。

　　1.2　乳腺囊性增生病上皮细胞增生程度分级

　　根据Page^〔2〕的分级标准略加修改，将乳腺导管或腺泡上皮细胞增生程度分为3级。Ⅰ级： 导管或腺泡上皮细胞增生多于2层而少于4层，分化良好； Ⅱ级： 上皮细胞增生超过4层，突向管腔内，相互桥接或充满管腔，但极性存在，伴有轻度异型性； Ⅲ级： 导管扩张，细胞簇集成乳头状或完全充满管腔，排列紧密，有明显异型性。Ⅰ级为一般性增生，Ⅱ、Ⅲ级为不典型增生。

　　1.3　免疫组化染色

　　采用SP法染色，SP药盒购自Maxiam公司。标本用10%甲醛固定，石蜡包埋后切片，常规脱蜡，洗涤，过氧化氢阻断30分钟，加第1抗体(抗TN单克隆抗体，Sigma)4℃过液，然后加第2抗体，底物用四盐酸二氨联苯胺(DAB)。最后以苏木素复染，中性树胶封片。光镜下观察染色情况。

　　1.4　阳性结果评定标准

　　阳性呈棕黄色至深棕色染色，在不同的乳腺组织中分布于基底膜、间质及上皮细胞中。

　　1.5　统计学处理

　　采用卡方检验， P＜0.01为相差非常显著。

　　2　结果

　　正常及Ⅰ级增生的乳腺组织中，上皮细胞及间质均无TN表达。Ⅱ级不典型增生的乳腺组织中有2例(20%)在增生的腺管基底膜部位可见阳性染色，间质中于腺小叶周围还可见条索状阳性染色并交织成网格状。Ⅲ级不典型增生的乳腺组织中，有8例(80%)于间质内可见大量纤维带状阳性染色，与Ⅱ级不典型增生相比明显增多(P＜0.01)，上皮细胞染色阴性。在浸润性导管癌中，TN于间质中有丰富表达，呈纤维带状围绕在癌细胞团周围，部分癌细胞浆内也有丰富表达，其表达阳性率为90%，与Ⅱ级不典型增生相比明显增多(P＜0.01)，而与Ⅲ级不典型增生相比其差异无显著性意义(P＞0.05)，见附表。

附表　不同乳腺组织中TN的表达情况

　　与Ⅱ级不典型增生比较， *P＜0.013　讨论

　　TN是细胞外基质中一种具有独特的六臂体结构的寡聚糖蛋白家族，主要由成纤维细胞和胶质细胞合成，某些上皮细胞也具有合成TN的能力^〔3〕。Chiquet等^〔4〕的早期研究发现，TN在胚胎乳腺开始发育的最初几天中出现，随后即消失； 在乳腺癌中，TN又重新出现在上皮细胞周围的间质中，因此认为TN具有促进上皮细胞生长的作用，与乳腺癌的发生有关。本实验结果发现，在正常乳腺组织及Ⅰ级增生的乳腺组织中无TN表达，不典型增生Ⅱ级的乳腺组织中开始出现TN阳性染色，不典型增生Ⅲ级的乳腺组织中TN表达阳性率达80%，比Ⅱ级不典型增生的乳腺组织明显增高，而乳腺癌中TN表达阳性率为90%，与不典型增生Ⅲ级相比相差不显著，提示乳腺上皮细胞Ⅲ级不典型增生时已经具有了乳腺癌的某些特点。TN在乳腺癌间质中的表达主要围绕在癌细胞团周围呈条带状，这与Iskaros等^〔5〕的结果一致，对此有文献报告^〔6〕，TN可能因此而阻断了癌细胞的浸润。不典型增生的乳腺组织间质中TN的表达均位于基底膜及其附近，因而推测，TN在Ⅲ级不典型增生乳腺组织间质中的表达可能起着限制不典型增生细胞向外生长的作用，其机理可能与TN是一种抗粘附分子有关。Jahkola等^〔7〕提出癌巢浸润边缘TN的表达预示将发生远处转移，其对无转移生存率的评估作用优于肿瘤的大小及分级。本实验未观察到该部位TN的表达。

　　此外，我们还发现，乳腺癌中部分癌细胞的胞浆内也有丰富的TN表达，其意义尚不十分清楚。Yoshida等^〔8〕的研究发现，癌细胞中TN表达阳性者术后5年生存率明显低于阴性者，提示癌细胞中TN表达阳性者预后不良。Kalembey等^〔9〕在动物实验中证实，TN mRNA不仅存在于正常乳腺上皮，也存在于乳腺癌的癌细胞及间质细胞中，提示癌细胞中TN的表达可能受到某些因素的调控。新近有作者报道甲状腺激素^〔10〕能抑制乳腺上皮细胞中TN的表达，而一些细胞因子如成纤维细胞生长因子(B-FGF)^〔11〕、白细胞介素(IL-1、IL-4)、肿瘤坏死因子(TNF-α)^〔12〕等能在组织培养中诱导TN的表达，但癌细胞中TN表达的调控是否与之有关还有待进一步研究。

　　参考文献

　　1　Chiquet-Ehrismann R. Tenascins, a growing family of extracellular matrix proteins. Experientia, 1995; 51(9-10)∶853

　　2　Page DL. Cancer risk assessment in benign breast biopsies. Human Pathol, 1986; 17(9)∶871

　　3　Erickson HP. Tenascin-C， tenascin-R, tenascin-X—a family of talented proteins in search of function. Curr Opin Cell Biol, 1993; 5(5)∶869

　　4　Chiquet ER, Makie EJ, Pearson CA, et al. Tenascin: an extracellular matrix protein involved in tissue interactions during fetal development and oncogenesis. Cell, 1986; 47(1)∶131

　　5　Iskaros BF, X Hu, Sparano JA, et al. Tenascin pattern of expression and established prognostic factors in invasive breast carcinoma. J Surg Oncol, 1998; 68(2)∶107

　　6　Sakakura T, Kusakabe M. Can tenascin be rebundant in cancer development? Perspect Dev Neurobiol, 1994; 2(1)∶111

　　7　Jahkola T, Toivonen T, Von Smitten K, et al. Expression of tenascin in invasion border of early breast cancer correlates with higher risk of destant metastasis. Int J Cancer, 1996; 69(6)∶445

　　8　Yoshida T, Ishihara A, Hirokawa Y, et al. Tenascin in breast cancer development is epithelial tenascin a marker for poor prognosis? Cancer Lett, 1995; 90(1)∶65

　　9　Kalembey I, Yoshida T, Iriyama KT, et al. Analysis of tenascin mRNA expression in the murine mammary gland from embryogenesis to carcinogenesis: an in situ hybridization study. Int J Dev Biol, 1997; 41(4)∶569

　　10　Meiners S, Marone M, Rittenhouse JL, et al. Regulation of astrocytic tenascin by basic fibroblast growth factor. Devl Biol, 1993; 160(2)∶480

　　11　Chiquet ER, Hagios S. The complexity in regulating the expression of tenascin. Bioessays, 1995; 17(10)∶873

　　12　Gonzalez-Sancho JM, Alvarez DM, Caelles C, et al. Inhibition of tenascin-C expression in mammary epithelial cells by thyroid hormone. Mol Carcinog, 1999; 24(2)∶99

(1999-04-21收稿，1999-06-21修回)